PRACTICA
PRUEBAS BIOQUIMICAS







PRUEBAS BIOQUIMICAS
INTRODUCCION
El metabolismo es toda una serie de reacciones que ocurren en los seres vivos. Estas reacciones incluyen procesos de obtención de energía como son: la composición de moléculas organicas en los quimiótrofos (catabolismo) o la captación de luz para el caso de los fotótrofos, así como de síntesis de material celular a partir de nutrientes esenciales (anabolismo).
En el laboratorio es posible conocer las características metabólicas de los microorganismos, inoculando en diferentes medios de cultivo, con sustratos que pueden utilizar como fuente de energía, fuente de carbono y de otros nutrientes esenciales para su crecimiento.

Como se ha observado en practicas anteriores, algunas bacterias y levaduras tienen características coloniales y microscópicas muy similares, lo que no permiten decidir si dos cultivos bacterianos o de levaduras morfológicamente similares pertenecen a una misma especie. Con algunas pruebas bioquímicas es posible su diferenciación e incluso su identificación. Cuando el número de pruebas es suficientemente amplio.
Las pruebas bioquímicas consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes
Su sistema de funcionamiento generalmente consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivoy que la bacteria al crecer incorpora o para realizar las pruebas bioquímicas se dispone de múltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.
En general el microorganismo se cultiva en medios que contienen una sustancia nutritiva específica o sustrato y después de la incubación del cultivo se examina para ver los cambios químicos que hayan ocurrido.

Algunas de las pruebas con las que trabajaremos son: MIO, LIA, VOGUES POSKAGUER, KLIGER, SIM Y CITRATO DE SIMMONS.


OBJETIVO:
Realizar pruebas bioquímicas en medios de cultivo para sustratos específicos que permitiran demostrar actividades metabólicas de bacterias

Comprender la importancia de las pruebas bioquímicas para caracterización e identificación de estos organismos.
PROCEDIMIENTO DE LA PRACTICA.
1. Preparar los medios de cultivo; MIO, LIA, VOGUES POSKAGUER, KLIGER, SIM Y CITRATO DE SIMMONS.
OBSERVACION: Cada mesa preparo un medio, la mesa 2 preparo el medio –LIA-
En el medio LIA se puede detectar la producción de la lisina descarboxilasa ya que se produce una reacción coloreada por un cambio en el pH del medio, que contiene como indicador púrpura de bromocresol

FORMULA ( Gramos por Litro)

Peptona de gelatina
5.0
Extracto de levadura
3.0
Glucosa 1.0
1.0
Lisina
10.0
Citrato de hierro y amonio
0.5
Tiosulfato de sodio
0.04
Púrpura de bromocresol
0.02
Agar
15.0

INSTRUCCIONES

Suspender 35g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber unos 15minutos. Calentar cuidadosamente, agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolución completa. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Enfriar en pico de f lauta dejando un fondo vertical apto para la punción.





CALCULOS:



Para la preparación de este; por cada mesa se ocuparan 2 tubos con 6ml c/u por lo tanto se tendra que preparar 72ml en total.
33 gr de LIA --- 1000ml de agua destilada
X ----72ml


2. Sembrar la bacteria (por el método que requiere cada medio
Se sembró E.Coli en cada uno de los medios por el método correspondiente.
PRUEBA
METODO DE SIEMBRA
MIO
Picadura
LIA
Picadura y doble estría
VOGUES POSKAGUER
asada
KLIGER
Picadura
SIM
Picadura
CITRATO DE SIMMONS.
estría








3. Incubar de acuerdo a las características del medio de cultivo.
PRUEBA
TIEMPO DE INCUBACION
MIO
1-2 días
LIA
1-2 días
VOGUES POSKAGUER
1-2 días
KLIGER
1-2 días
SIM
1-2 días
CITRATO DE SIMMONS.
4 días

4. Hacer la lectura de identificación de la bacteria.
MIO
1-Movilidad:
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas alla de la línea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la línea de siembra.

2-Ornitina descarboxilasa:
Resultado positivo: color púrpura.
Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un colorviolaceo en la superficie del medio.

3-Prueba del indol :
La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina.
Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador.
Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.

RESULTADOS

MOVILIDAD
ORNITINA DESCARBOXILASA
INDOL
Serie 1
+
+
-
Serie 2
-
+
-



LIA
1- Decarboxilación de la lisina:
Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.

2-Producción de acido sulfhídrico:
-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo

RESULTADOS


DESANIMACION DE LA LISINA
ACIDO SULFHIDRICO
Serie 1
+
+
Serie 2
+
+


VOGUES POSKAGUER

1-Acetonina:
prueba positiva: esta indicada por el desarrollo  de un color rojo a los 15 minutos de añadido los reactivos
prueba negativa: da un color cobrizo.


Acetonina
Serie 1
+
Serie 2
+




KLIGER

1-Pico alcalino/fondo acido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.

2-Pico acido/fondo acido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.

3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.

4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.

5-Elennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce acido sulfhídrico.



GLUCOSA
SACAROSA
LACTOSA
ACIDO SULFHIDRICO
Serie 1
+
+
+
-
Serie 2
+
+
+
-


SIM

Cepas móviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas alla de la línea de siembra.

Cepas inmóviles: el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra.

Cepas H2S
positivas: ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en todo el medio.
negativas: el medio permanece sin cambio de color.

Cepas indol
positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovacs o de Erlich.
negativas: sin cambio de color.


MOVILIDAD
H2S
INDOL
Serie 1
+
+
+
Serie 2
+
+
+



CITRATO DE SIMMONS

Citrato Permeasa
Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay
Desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

RESULTADOS


CITRATO PERMEASA
Serie 1
+
Serie 2
+



IMPORTANTE

POR MEDIO DE TABLAS PODEMOS IDENTIFICAR EL TIPO DE BACTERIA QUE ES SEGÚN LOS RESULTADOS POSITIVOS O NEGATIVOS.





CONCLUSION

En esta practica realizamos las pruebas bioquímicas cumpliendo el objetivo que en estos medios de cultivo y la bacteria específica nos permitió demostrar actividades metabólicas de bacteria, para después poder identificarla. Tomando en cuenta la importancia para la caracterización e identificación de microorganismos. (enterobacterias)