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Bioquimica - Reacción de Biuret, Reacción Xantoprotéica, Reacción Kovac o Hopkins - Cole



Procedimiento:
01.-Reacción de Biuret.
Tomamos 3 tubos de ensayo identificando cada uno en forma numeral, al primer tubo añadimos 1ml de la solución problema Ns 4. Al segundo tubo añadimos 1ml de solución de caseína. Al tercer tubo añadimos 1ml de solución de aminoácido arginina. Luego se agrega a cada muestra 5 gotas de NaOH al 2.5 N más 3 gotas de CuSoa‚„ al 1%.
Resultado: Una coloración azul indica presencia de aminoácido, una coloración violeta indica presencia de proteínas.

|Ns Muestra |Soluciones a utilizar |Colores Presentes |
|Tubo Ns 1: |1 ml Solución Problema Ns 4 | |
| |5 gotas de NaOH al 2.5 N |Azul |
| |3 gotas de CuSoa‚„ al 1%. | |
|Tubo Ns 2: |1 ml de solución de glucosa | |
| |5 gotas de NaOH al 2.5 N |Violeta |
| |3 gotas de CuSoa‚„ al 1%. | |
|Tubo Ns 3: |1 ml de agua como testigo | |


| |5 gotas de NaOH al 2.5 N |Azul |
| |3 gotas de CuSoa‚„ al 1%. | |

Observaciones: Se puede observar que en el 1 y 3 tubo muestra un color azul la cual se puede decir que está presente un aminoácido de tipo arginina.

02 Reacción Xantoprotéica:
Se toman tres tubos de ensayo, identificando cada uno en forma numeral, al primer tubo añadimos 1 ml dela solución problema Ns 4. Al segundo tubo añadimos 1 ml de solución de tirosina. Al tercer tubo añadimos 1ml de solución de arginina. Seguidamente se agrega a cada tubo 10 gotas de HNO3 concentrado. Mezclando bien, se calienta los tres tubos en agua hirviente. Luego se le añade 4 ml de NaOh al 20%.
Resultado: Un precipitado blanco que al calentar se convierte en amarillo indica presencia de Tirosina.

|Ns Muestra |Soluciones a utilizar |Colores Presentes |
|Tubo Ns 1: |1 ml Solución Problema Ns 4 | |
| |10 gotas de HNO3 |Blanco |
| |4 gotas de NaOh al 20% | |
|Tubo Ns 2: |1 ml de solución de Tirosina | |
| |10 gotas de HNO3 |Amarillo |
| |4 gotas de NaOh al 20% | |
|Tubo Ns 3: |1 ml de solución de arginina | |
| |10 gotas de HNO3 |Blanco |
| |4 gotas de NaOh al 20% | |

Observación: Se observa en el tubo 1 y 3 un precipitado de color blanco, la cual indica que esta presente un aminoácido, se puede decir que el resultado de solución problema Ns 4 es la arginina.

03.- Reacción Kovac o Hopkins - Cole:
Se toman tres tubos de ensayo, identificando cada uno en forma numeral, al primer tubo añadimos 1 ml de la solución problema Ns 4. Alsegundo tubo añadimos 1 ml de solución de triptófano. Al tercer tubo añadimos 1ml de solución de arginina. Seguidamente se agrega a cada tubo 10 gotas de Reactivo de Kovac. Mezclando bien, darle a los tubos de ensayo una inclinación de 45s y dejar caer la solución por las paredes del tubo 2 ml de acido Sulfúrico Concentrado. No agitar.

|Ns Muestra |Soluciones a utilizar |Colores Presentes |
|Tubo Ns 1: |1 ml Solución Problema Ns 4 | |
| |10 gotas de Reactivo de Kovac |Anillo Naranja |
| |2 ml de acido Sulfúrico | |
|Tubo Ns 2: |1 ml de solución de Tirosina | |
| |10 gotas de Reactivo de Kovac |Anillo Violeta |
| |2 ml de acido Sulfúrico | |
|Tubo Ns 3: |1 ml de solución de arginina | |
| |10 gotas de Reactivo de Kovac |Anillo Naranja |
| |2 ml de acido Sulfúrico | |

Resultado: Se observa en el tubo 1 y 3 un anillo color naranja, la cual indica que esta presente un aminoácido, la arginina. También se puede visualizar en la muestra Ns 2 un anillo violeta, la cual indica presencia de triptófano proteína en conclusión se puede decir que la solución problema Ns 4 es un aminoácido.

04 Reacción Aminoácidos Azufrados:
Se toman tres tubos de ensayo, identificando cada uno en forma numeral. Al primer tuboañadimos 1 ml de la solución problema Ns 4. Al segundo tubo añadimos 1 ml de solución de Cisteína y al tercer tubo añadimos 1ml de solución de Arginina. Seguidamente se agrega a cada tubo 2 ml de NaOh 2.5 N. Mezclando bien, se pone a hervir por 5 minutos, luego de hervir agregarle a cada uno de los tubos 5 gotas de Acetato de Plomo CH3-COO-Pb y se coloca a hervir nuevamente.

|Ns Muestra |Soluciones a utilizar |Colores Presentes |
|Tubo Ns 1: |1 ml Solución Problema Ns 4 | |
| |2 ml de NaOh 2.5 N |Blanco |
| |5 gotas de Acetato de Plomo | |
|Tubo Ns 2: |1 ml de solución de Tirosina | |
| |2 ml de NaOh 2.5 N |Gris Azufrado |
| |5 gotas de Acetato de Plomo | |
|Tubo Ns 3: |1 ml de solución de arginina | |
| |2 ml de NaOh 2.5 N |Blanco |
| |5 gotas de Acetato de Plomo | |

Resultado: Se observa en el tubo 1 y 3 un precipitado blanco, la cual indica que esta presente un aminoácido la (arginina), y en el segundo tubo un color gris azufrado, la cual esta presente un aminoácido. Se ha llegado a la conclusión que la solución problema es un aminoácidos.

05 Reacción de Sakaguchi:
Se toman tres tubos de ensayo, identificando cada uno en forma numeral. Al primer tubo añadimos1 ml de la solución problema Ns 4. Al segundo tubo añadimos 1 ml de solución Arginina. Al tercer tubo añadimos 1ml de solución de Acido Glutámico. Seguidamente se agrega a cada tubo 5 gotas de NaOh 2.5 N y 4 gotas de alfa-naftol y 1 ml de solución de hipoclorito de sodio.

|Ns Muestra |Soluciones a utilizar |Colores Presentes |
|Tubo Ns 1: |1 ml Solución Problema Ns 4 | |
| |5 gotas de NaOh 2.5 N |Rosado |
| |4 gotas de alfa-naftol | |
| |1 ml de solución de hipoclorito de sodio. | |
|Tubo Ns 2: |1 ml de solución de arginina | |
| |5 gotas de NaOh 2.5 N |Rosado |
| |4 gotas de alfa-naftol | |
| |1 ml de solución de hipoclorito de sodio. | |
|Tubo Ns 3: |1ml de solución de Acido Glutámico | |
| |5 gotas de NaOh 2.5 N |Blanco |
| |4 gotas de alfa-naftol | |
| |1 ml de solución de hipoclorito de sodio. | |

Resultado: Se observo un precipitado rosado en el tubo uno y dos la cual se dice que esta presente un aminoácido.


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