Cromatografía en Capa Fina (TLC). Una herramienta útil para el Conservador-Restaurador
Técnicas analíticas - 2 junio, 2011
En este artículo [1]se presenta una técnica analítica aplicable a los objetos artísticos, para proporcionar información útil al conservador-restaurador para hacer propuestas de intervención muy precisas. Se plantea cual ha sido y es el uso de la cromatografía en capa fina o TLC (Thin-Layer Chromatography) dentro del marco de los métodos de analisis cromatograficos, tanto a nivel general, como concretamente en el ambito de los bienes patrimoniales. Se hace también una aproximación a los mecanismos de funcionamiento de la técnica, para detallar acto seguido como el conservador-restaurador puede hacer, él mismo, un analisis basado en TLC.

Núria Oriols Pladevall. Licenciada en Ciencias Químicas por la Universitat Autònoma de Barcelona y Diplomada en Conservación y Restauración de Pintura por la ESCRBCC.
INTRODUCCIÓN
Últimamente, ciencia y restauración son palabras que a menudo aparecen juntas, sobre todo para evidenciarlas complementarias, dentro del marco de la tan denominada interdisciplinariedad. Varias situaciones con connotaciones diferentes afloran de la conexión de sus significados:
* Hacer ciencia, entendida como investigación, dentro de la conservación-restauración, hecho del cual se hizo eco el pasado congreso del GEIIC 2]
* Utilizar la conservación-restauración para hacer ciencia, lo que hacen grandes instituciones de investigación. Las universidades, por ejemplo, ponen a punto métodos tecnológicosinstrumentales, tanto para el analisis de los materiales constituyentes de las piezas artísticas, como porque participan en los procesos propios de una intervención, como por ejemplo las limpiezas o las reintegraciones.
* Poner la ciencia al servicio de la conservación-restauración. Aquí se podrían incluir los tres órdenes que ha definido Benoit de Tapol 3]
1.     Investigaciones para conocer el pasado del objeto. Estudios de identificación de materiales y dataciones.
2.     Estudios que revelen el presente del objeto, que incluyen tanto la caracterización del estado de conservación, como la identificación de los productos de alteración o el control de calidad de los procesos curativos.
3.     Analisis destinados a definir el futuro del objeto, que pasan por el estudio de las compatibilidades de los materiales o las interacciones del objeto con el ambiente.
El mismo Benoit de Tapol dice que “los restauradores opinan a menudo que la ciencia aplicada en el campo de la conservación-restauración no cumple sus expectativas”. Y es que, pese a la numerosa literatura sobre el tema y las declaraciones de intenciones, si bien se practica la interdisciplinariedad, a veces, se hace de forma muy compartimentada –cada uno en su terreno– y sin el feedback necesario y enriquecedor. No se trata, ahora, de que el conservador-restaurador se convierta de repente en un especialista en química, pero tampoco se trata de que los científicos protejan sus parcelas de conocimiento con un exceso de celo, que a veces los lleva a ser crípticos.
La intención del presenteartículo es presentar una técnica de analisis, que puede resultar útil al conservador-restaurador para obtener información sobre el pasado del objeto, en relación a la naturaleza de los materiales que estan presentes, para así poder interpretar mejor los procesos de degradación y, en consecuencia, realizar un buen diagnóstico y una propuesta de intervención futura precisa.
Se trata de la Cromatografía en Capa Fina o TLC (Thin-Layer Chromatography). La cromatografía de gases GC (Gas Chromatography) o la cromatografía líquida de alta presión HPLC (High Performance Liquid Chromatography) son métodos bastantes frecuentados por los conservadores-restauradores como técnicas instrumentales útiles y apropiadas para la identificación, ya sea de aglutinantes organicos de los medios pictóricos, ya sea de barnices.
La diferencia, y también la ventaja de la TLC, es que, siendo una técnica basada en los mismos principios que las anteriores, no requiere un instrumental tan complejo y, por lo tanto, su manipulación resulta mucho mas sencilla.
El instituto de conservación norteamericano Getty[4] inició en 1989 un programa de desarrollo de metodologías para la identificación de aglutinantes de los medios pictóricos. Inicialmente todos los esfuerzos estaban centrados en la utilización de instrumentación avanzada. No obstante, se fue reconociendo la necesidad de incorporar métodos menos tecnificados, de bajo coste y de facil aplicación. Por eso es por lo que actualmente se investigan tanto metodologías similares a las del diagnóstico médico, como metodologías basadas enTLC.
El hecho concreto de que toda una institución de referencia en el mundo de la conservación-restauración investigue y tenga publicaciones basadas en TLC, junto con la circunstancia de que muchos programas de cursos de formación para conservadores-restauradores incluyan la explicación de esta técnica, son indicios que nos hacen pensar que, en el campo de los analisis de objetos de arte, se esta dando una recuperación o una introducción de este método de identificación y separación de sustancias.
LA CROMATOGRAFÍA Y SU EVOLUCIÓN
En algunas circunstancias domésticas y anecdóticas que todos hemos vivido, estamos observando, sin saberlo, los efectos de los mismos fenómenos que rigen los procesos cromatograficos. Por ejemplo, hemos visto como al caer algo de vino sobre un mantel, se dibuja una mancha de anillos concéntricos de diferentes tonalidades. O quizas, nos hemos fijado también, que cuando queremos eliminar una mancha de tinta negra frotando con un papel impregnado de alcohol, ésta se acaba dispersando, dejando manchas de otros colores diferentes.
La introducción de la cromatografía, como técnica de analisis científico, la debemos a los trabajos del botanico Michael Tswett,[5] que en 1906 consiguió separar los diferentes colorantes de una planta, entre ellos la clorofila, haciendo pasar una dilución de la muestra a través de una columna de vidrio rellena de un material adsorbente.[6] La solución iba bajando por gravedad y mojando este material de forma que, a medida que avanzaba, se veía cómo iban quedando anillos de colores diversos aalturas diferentes de la columna, cada uno de ellos correspondiendo a un colorante concreto.
De aquí se pasó a utilizar la cromatografía en papel, por su simplicidad de uso. En ésta, el adsorbente es fijo: siempre es celulosa. Hacia el final de la década de los años 1930, se vio la ventaja que suponía ampliar la gama de adsorbentes posibles, extendiéndolos en forma de una fina capa sobre vidrios de microscopio y utilizandolos de forma similar al papel.
La cromatografía en capa fina, tal y como la conocemos ahora, se consolidó hacia 1950, sobre todo gracias a los trabajos del científico Stahl, encaminados a mejorar la capacidad de separación y la reproductibilidad de la técnica, así como a sistematizar nuevas aplicaciones. En aquel momento, casi todos los analisis cromatograficos eran precisamente en capa fina.
Desde entonces, ha habido una rapida evolución hacia la instrumentalización de la técnica, especialmente en la década de los 60. Sobre todo se han automatizado los analisis basados en cromatografía en columna, dando lugar a la HPLC, que es la técnica, con diferencia, mas extensamente utilizada hoy en día.
Actualmente, se ven las técnicas TLC i HPLC como complementarias o rivales, según sean las escuelas científicas[7] que las observan y comentan.
La ventaja del método instrumental HPLC es que, al ser automatizado, permite cuantificar las muestras, a diferencia de la TLC, que es manual y sólo cualitativa, o en algunos casos semicuantitativa, si no se utilizan aparatos complementarios como los densitómetros.
Por otra parte, la ventaja de laTLC –como ya se ha mencionado– radica en ser una técnica muy accesible a nivel de costes, precisamente por no necesitar instrumental. Igualmente es una ventaja su eficacia. Al tratarse de una técnica muy sensible, precisa muy poca cantidad de muestra para hacer una identificación correcta.
La única objeción que se puede hacer, es que se debe actuar con mucho cuidado durante el analisis para obtener reproductibilidad en los resultados, puesto que intervienen muchas variables, a veces difíciles de acotar, en el transcurso de la aplicación, como por ejemplo la temperatura ambiental, la saturación en disolventes en el interior de la cubeta, etc. Éste puede ser uno de los motivos que ha provocado un cierto retroceso en su uso en las décadas comprendidas entre los 60 y los 80 y, sobre todo, una carencia de publicación de metodologías de analisis basados en TLC.
No obstante, en 1988 apareció la revista científica The Journal of Planar Chromatography, que pone de manifiesto un resurgimiento de la técnica, favorecido posiblemente por la aparición en el mercado de nuevos tipos de adsorbentes y aparatos complementarios que ayudan a la reproductibilidad y a la cuantificación de las analíticas.
Actualmente la TLC tiene especialmente buena acogida para llevar a cabo analisis en los sectores medioambientales, forenses (sobre todo de drogas) y en la industria de alimentación y farmacéutica.
El USO DE LA TLC EN EL CAMPO DE LOS ANALISIS DE
OBJETOS DE ARTE
La mayoría de los manuales de referencia en el ambito de la conservación-restauración mencionan laaplicación de la TLC para el analisis de muestras procedentes de obras de arte. No obstante, no se ha realizado un uso demasiado extenso.
Los primeros documentos[8] donde se menciona la técnica son de 1958. En general, y a la luz de la búsqueda bibliografica realizada, se puede concluir que su aceptación y uso ha seguido una evolución totalmente paralela a los otros campos.
| Analisis generales | Analisis de objetos de arte |
Años 50 | Introducción y asentamiento de la técnica | 1958: Primeros documentos donde se cita la técnica cromatografica |
Años 60, 70, 80 | Retroceso en el uso de la metodología en favor de los métodos instrumentales | Algunos artículos descriptivos de casos puntuales y publicaciones de recapitulación |
A partir de los 90 | Resurgimiento de la TLC | 1996: Manual de TLC para restauradores-conservadores de The Getty Conservation Institute |
Diferentes artículos han ido apareciendo puntualmente, sobre todo en Studies in Conservation,[9] explicando principalmente casos concretos de identificación de aglutinantes de los medios pictóricos en varias piezas artísticas. La gran mayoría, o bien son de la década de los 50 o de los 60 o, si son mas recientes, pertenecen a instituciones de areas geograficas como la India[10] o la China, donde la accesibilidad de instrumental complejo es a veces difícil.
Ahora bien, ha habido también publicaciones en las que, con voluntad de síntesis y de compendio, se explica de forma general y sistematica, cuales son y cómo llevar a cabo este tipo de analisis. Principalmente se trata de cuatrodocumentos
§     El primero, de 1958, es el artículo de Margaret Hey[11] en el que ya hacía una recopilación de cuales eran, hasta entonces, las posibilidades de analizar los medios pictóricos basandose en la cromatografía sobre papel. Menciona el hecho de que, con respecto a la pintura, la determinación de los aglutinantes pictóricos es siempre mas complicada que la identificación de los pigmentos puesto que, por una parte, éstos estan siempre en menos proporción y, por la otra, han sido sometidos a procesos de envejecimiento. No obstante, propone diferentes tipos de analíticas. Para realizar las identificaciones, divide los aglutinantes pictóricos en tres grupos: proteínas, aceites y resinas naturales.
§     Un excelente documento, según el criterio de Mary F. Striegel 12] es el que presentó Wilma Roelofs[13] en la sesión plenaria del congreso del ICOM en Madrid en 1972. Bajo el título de Thin Layer Chromatography: An aid for the analysis of Binding Materials and natural Dyestuffs for Works of Art, describe el procedimiento general de aplicación de la técnica, y presenta metodologías concretas para el analisis de resinas naturales, ceras, gomas y colas.
§     Otra recopilación importante es la que hizo L. Masschelein-Kleiner[14] en 1986 dentro de la publicación Analysis of Paint Media, Varnishes and Adhesives. En el apartado de cromatografía en capa fina adjunta una tabla donde describe diferentes sistemas para hacer analisis de medios pictóricos, divididos también en este caso en cuatro grupos de sustancias: hidratos de carbono, proteínas, cerasy resinas naturales.
§     La publicación mas reciente de recopilación de métodos cromatograficos por analisis de aglutinantes pictóricos, proviene de The Getty Conservation Institute, como ya se ha mencionado. Es el libro de Mary F. Striegel y Jo Hill 15] publicado en 1996, que recoge los trabajos de investigación en este campo realizados por los propios investigadores de la institución.
Ninguna de estas recopilaciones habla extensamente del grupo de aceites. Lo que llama la atención, puesto que el aceite de linaza es, con diferencia, uno de los aglutinantes mas utilizado en las técnicas artísticas. ¿Se pueden analizar por TLC? ¿Se han hecho estudios?
En 1972 A. Bevenue 16] del Laboratorio di Chromatografia del CNR de Roma, publicó un documento donde se proponía un método de identificación de aceites basado en el analisis por TLC de esteroles, sustancias presentes en la composición de este grupo de aglutinantes. Incluso, se apuntaba la posibilidad de utilizar la técnica como método de datación de objetos artísticos, aprovechando que el aceite de linaza presenta cromatogramas diferentes, según sea su grado de envejecimiento. Las muestras de medios pictóricos artísticos le eran proporcionadas por Paolo Mora. No obstante, la propuesta no tuvo éxito. Sólo un año después John Mills[17] y Raymond White, de la National Gallery de Londres, publicaron en Studies in Conservation un artículo expresando opiniones no demasiado favorables al respecto.
¿Ingleses contra italianos o ciencia rigurosa? Según los ojos con que se mire, se pueden extraerconclusiones muy diferentes. Es cierto, sin embargo, que en el libro de Mary F. Striegel (americana) se apunta que se continúa investigando en la línea de encontrar una buena metodología de analisis para aceites basada en TLC, pese a que no se presenta ninguna concreta.
Y finalmente, cabe señalar que, a pesar de que tampoco son demasiado citados en las recopilaciones mencionadas, hay un buen puñado de artículos[18] en la bibliografía científica donde se encuentra descrito cómo analizar colorantes naturales y pigmentos organicos sintéticos presentes en las pinturas de los bienes culturales.
En resumen, la TLC aplicada en el campo de los objetos artísticos, se utiliza tanto para analizar pigmentos y colorantes, como para el analisis de aglutinantes del medio pictórico, divididos estos últimos, en 4 grupos:
* Separación e identificación de aminoacidos, presentes en los aglutinantes proteicos como huevo, caseína y colas animales.
* Separación e identificación de hidratos de carbono, que permiten identificar colas organicas como goma arabiga o goma de tragacanto, o aditivos como el almidón y la miel.
* Separación e identificación de ceras.
* Separación e identificación de resinas naturales (damar, colofonia, almaciga, goma laca, etc.) aplicadas como barnices.
¿QUÉ ES LA CROMATOGRAFÍA?
Imaginemos un grupo de cuatro personas sentadas en el sofa de su casa un viernes por la noche tras un duro día de trabajo. De repente, reciben una llamada que los invita, por ejemplo, a ir al cine.
Cada una de las cuatro personas del grupo (denominémoslascomponentes A, B, C y D de una muestra) se sentira mas o menos atraída por la invitación, según sea el interés que le suscite la película en concreto, en competencia directa con las ganas que tenga de quedarse “retenido” en el sofa en función del grado de cansancio.
El resultado de todo podría acontecer de la siguiente manera
El componente A (el mas cansando de todos), sólo se ha levantado y no ha llegado a salir por la puerta de casa. Al contrario, el componente D, fan incondicional del director de la película, ha llegado hasta el cine. El componente B, indeciso, sólo ha ido hasta el final de la calle de su casa, donde ha decidido no llegar al destino propuesto. Y el componente C tenía ganas de salir, pero el título sugerido no era de su gusto, y por lo tanto se ha quedado a unos 5 minutos del cine.
Pues bien, en un proceso cromatografico tienen lugar fenómenos paralelos.
En vez de “sofa”, “casa” y “calle”, hablamos de fase estacionaria, constituida por un material adsorbente contenido en una columna o esparcido encima de una superficie plana (papel o placa). Y no hay llamadas de teléfono, sino una fase móvil que se desplaza respecto a la primera. Ésta puede estar formada por una mezcla de diferentes disolventes, que reciben el nombre de sistema eluyente. En este caso, lo denominamos fase móvil líquida. Por otra parte, hablamos de fase móvil gaseosa, cuando es un gas inerte el que se desplaza por encima de la fase estacionaria transportando los componentes de la muestra.
La esencia de la cromatografía es siempre la misma, idéntica para cualquiertécnica de aplicación (HPLC, GC o TLC).
Se trata de separar e identificar los diferentes componentes de una muestra, basandose en la competencia de interacciones que éstos presentan entre las dos fases: móvil y estacionaria.
Cada sustancia se “repartira” entre ellas, según sea su afinidad respectiva, dependiendo de fenómenos como la solubilidad, las interacciones químicas, la presión de vapor, etc.
La clasificación de las diferentes técnicas cromatograficas se hace en función de la relación de estas dos fases: móvil y estacionaria, según sea sólido/líquido, sólido/gas, líquido/líquido o líquido/gas:
| Según la fase móvil | Según el soporte de la fase estacionaria | NOMBRE |
| | | |
CromatografíaSólido / líquido | líquida | columna | Cromatografía en columna |
| | | HPLC |
| | | |
| | superficie plana | Cromatografía en papel |
| | | TLC o CCP |
| | | |
CromatografíaSólido / gas | gas | columna | Cromatografía de gas (GC) |
LA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
En un proceso de cromatografía líquida entran en juego, por lo tanto, tres elementos principales: el adsorbente y su forma física de apoyo, el sistema eluyente y su composición concreta, y finalmente la muestra a analizar y su naturaleza química.
El soporte de la TLC son placas de maximo 20 x 20 cm de vidrio, aluminio o plastico, recubiertas por una cara de una fina capa de material adsorbente, que tradicionalmente ha sido celulosa, gel de sílice, óxido de aluminio o poliamida, y que últimamente se ha ampliado la gama de posibilidades a sílicesquímicamente modificados.
El número de sistemas eluyentes son casi infinitos. Mayoritariamente son combinaciones de disolventes de diferentes polaridades, con presencia ocasional de acidos o bases. El único requisito que se exige a estos reactivos químicos, es que contengan pocas impurezas, y por lo tanto, es redundante decir que su grado de riqueza sea elevado. Son aconsejables los productos de calidad PA (para analisis), como mínimo.
Con respecto a las muestras, la mayoría de los materiales utilizados en los procedimientos artísticos son sustancias complejas. Un barniz como el damar, por ejemplo, no es una sustancia química pura, sino que esta formado por muchos componentes, los triterpenos, entre otros.
Cuando se “siembra” una gota de una disolución de esta resina cerca del extremo de una placa cromatografica, y acto seguido, se sumerge en un determinado sistema eluyente contenido en un recipiente especialmente pensado para este uso, éste empieza a ascender por capilaridad por encima de la placa (fase estacionaria) arrastrando la muestra de barniz.
Lo que sucedera, transcurridos unos minutos, es que cada componente diferente del damar, se quedara a una distancia concreta del origen, según presente mas o menos afinidad por los disolventes de la fase móvil, “dibujando” un spot o mancha. El conjunto de todas estas manchas y su distribución relativa, se convierte en una especie de huella digital de la resina, que la permite identificar.
La pregunta que surge ahora, es cómo el conservador-restaurador, sabe que éste conjunto de “manchas” correspondenprecisamente al damar y no a ningún otro barniz. La respuesta esta en los patrones.
Dos resinas diferentes como el damar, la almaciga, la colofonia, la sandaraca o también la goma laca, nunca presentaran la misma composición química, y por lo tanto, siempre se puede encontrar un sistema eluyente y unas condiciones cromatograficas concretas que nos permitan obtener distribuciones de manchas propias y perfectamente distinguibles para cada uno de los barnices.
La forma de actuar, por lo tanto, es cromatografiar junto con la muestra-problema que queremos analizar, todos aquellos patrones de resinas conocidas que sospechamos que pueden constituir el barniz de nuestra pieza.
Una vez desarrollada la cromatografía, por comparación con las “huellas digitales” obtenidas, podremos identificar, sin duda, la naturaleza del barniz presente en el objeto artístico.
Es absolutamente recomendable, para obtener buenas identificaciones, sembrar siempre patrones junto a la muestra que se quiere analizar, para que se desarrollen exactamente con las mismas condiciones y no utilizar resultados de antiguas cromatografías. Variables como la temperatura o el grado de saturación de la cubeta influyen en el proceso, provocando pequeñas variaciones en la distribución de las diferentes alturas de las “manchas”.
Es cierto, tal y como dicen Mauro Matteini y Arcangelo Moles 19] que la cromatografía en capa fina o TLC presenta el inconveniente de requerir un trabajo prolongado de puesta a punto de las condiciones operativas: encontrar qué composición debe tener el sistema eluyente,determinar el tipo de adsorbente a utilizar y concretar otras condiciones cromatograficas que veremos mas adelante, todo para la resolución de un problema analítico muy concreto. Ahora bien, una vez han sido establecidas las condiciones óptimas, la cromatografía de capa fina se convierte en uno de los métodos con mas ventajas de la química analítica.
Así pues, en el caso de la TLC, una posible colaboración entre ciencia y restauración podría ir por el siguiente camino: primero, el científico investiga y encuentra las condiciones operativas óptimas (pone a punto una metodología) para resolver un determinado problema, por ejemplo, la identificación de barnices. Una vez encontrada, la presenta al conservador-restaurador traducida a un sencillo protocolo de analisis, que éste puede seguir, él mismo, cada vez que se encuentre en la necesidad de resolver analíticamente una identificación similar.
¿CÓMO SE HACE UNA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA?
Protocolo estandar de desarrollo cromatografico TLC
1- Según las condiciones operativas de cada metodología, se puede necesitar un tratamiento previo de la placa, o no. Puede tratarse de:
* Activación dentro de la estufa a 120º C durante 30 minutos para eliminar toda el agua adsorbida.
* Limpieza previa para eliminar impurezas, haciendo ascender por la placa el mismo sistema eluyente que se utilizara en la cromatografía, pero sin haber sembrado las muestras.
2- Preparación del sistema eluyente en las proporciones indicadas. Acostumbran a ser suficientes entre 25 y 50 ml en total. Se introduce en lacubeta, de manera que el nivel del líquido no quede por encima de 1 cm de altura. Si hace falta, se vierte una cantidad controlada del eluyente dentro de la cubeta tapada, durante un tiempo determinado, para que tenga lugar el equilibrio entre las fases del líquido y vapor (saturación de la cubeta).
3- Con ayuda de un lapiz se hace una línea a unos 2 cm de uno de los lados de la placa. Ésta sera la línea de base sobre la cual se sembraran todas las preparaciones. Se marca también un número de referencia para cada muestra y para cada patrón.
4- Se procede al sembrado de muestras. Con la ayuda de una micropipeta capilar se deposita la cantidad estimada de cada muestra y patrón. Normalmente se utilizan entre 1 y 10 microlitros. Para que el area de la mancha no sea demasiado grande, es preferible hacer deposiciones sucesivas de 1 microlitro, mas que 5 microlitros de una vez, por ejemplo.
5- Para favorecer una mejor resolución del proceso cromatografico, hace falta que el disolvente con el que hemos preparado muestras y patrones, se evapore totalmente antes de iniciar la cromatografía. Podemos forzar esta evaporación con un secador de aire. No obstante, hay que ir con cuidado y no transmitir demasiado calor a las muestras.
6- Se introduce la placa, dentro de la cubeta, teniendo en cuenta que no hay que tenerla destapada mas tiempo de lo estrictamente necesario. Se deja que el eluyente ascienda por la placa hasta una altura tal que falten 1 o 2 cm para llegar al extremo superior. O si ya se tiene el tiempo controlado, se deja transcurrir el tiempo queindica el protocolo.
7- Una vez transcurrido el tiempo necesario, se saca la placa de la cubeta y, antes de que los disolventes se evaporen, se marca la línea dónde ha llegado el frente del sistema eluyente. Se deja acabar de evaporar a temperatura ambiental, hasta que la placa esté bien seca.
8- Si los compuestos no son visibles ni con luz natural ni con luz UV, hace falta hacer un proceso de revelado químico, rociando sobre la placa un producto revelador. El revelador es una sustancia capaz de reaccionar químicamente con los compuestos cromatografiados, dando productos de reacción que adsorben en la zona visible, y por lo tanto presentan color, o en la zona UV, siendo semillas observables con lamparas de Wood. Este paso es aconsejable hacerlo en cabinas de extracción de gases y con elementos de protección personal.
9- Se visualizan los resultados obtenidos, a simple vista o con luz UV. Se documenta fotograficamente el cromatograma, o graficamente, resiguiendo los spotsobtenidos con lapices, en caso de sustancias labiles o no visibles. También se puede hacer una documentación numérica, calculando los valores Rf de cada mancha obtenida, o lo que es lo mismo, de cada componente cromatografiado.
El valor Rf para una mancha determinada se define así
Rfi= | distancia recorrida por cada mancha “i” |
| distancia recorrida por el frente del eluyente |
Acto seguido se presenta el diagrama de flujo a seguir, para resolver un problema analítico de identificación que se le puede presentar al conservador-restaurador.
| acotación de la NATURALEZAQUÍMICAde la MUESTRA a analizar | |
| | | | | |
| | | | | |
colorante | | aglutinante proteico | | goma vegetal | | cera | | resina |
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| | elección de la METODOLOGÍA adecuada | | |
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| | PREPARACIÓN DE LA MUESTRA | | |
| | | | | | obtención | | |
| | | | | | | extracción | | |
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| | elección de los PATRONES | | |
| | | | | | | | | |
| | preparación de los patrones | | |
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| | DESARROLLO CROMATOGRAFICO | | |
| | | | | | | | | | | | | | | | |
ALGUNAS NOTAS FINALES
Sobre las metodologías
Para un grupo concreto de sustancias hay muchos procedimientos posibles basados en TLC. A menudo, la diferencia entre ellos son pequeñas variaciones con respecto a las proporciones de los disolventes del sistema eluyente. Otras veces, sin embargo, divergen, incluso, en la naturaleza del adsorbente escogido. Acto seguido se resumen algunas de las metodologías que parecen tener mas aceptación, según la bibliografía consultada.[20]
|
Para analisis de resinas naturales aplicadas en forma de barniz |
Placa: Merck HPLTC plate Sílicagel 60 F254 10×10 cm |
Sistema eluyente: benzeno-metanol (95:5) |
Revelador: Tricloruro de antimonio disuelto en cloroformo |
|
Para analisis e identificación de aglutinantes proteicos (huevo, caseína y colas animales) |
Placa: Macherey-Nagel Cellulose MN 300 20×20 cm |
Sistema eluyente: acetonitril-agua (85.15) |Revelador: acido aminohipúrico |
|
Para analisis de hidratos de carbono que permiten identificar colas organicas como la goma arabiga, la goma tragacanto, o aditivos como el almidón y la miel. |
Placa: Merck HPLTC plate Sílicagel 60 F254 10×10 cm |
Sistema eluyente: n-butanol-acido acético glacial-agua (80:20:20) |
Revelador: Solución etanólica de ninhidrina |
|
Para analisis de ceras |
Placa: Merck HPLTC plate Sílicagel 60 F254 10×10 cm |
Sistema eluyente: éter de petróleo-éter dietílico-acido acético (90:10:1) |
Revelador: anisaldehido-acido sulfúrico |
|
Para analisis de pigmentos organicos |
Placa: Merck HPLTC plate Sílicagel 60 F254 10×10 cm |
Sistema eluyente 1: Benzeno-ciclohexano-cloroformo-acido acético 50 % (60:20:10:10)Sistema eluyente 2: Etanolamina-dimetil sulfóxido-benzeno (15:30:55) |

Analisis Cuantitativo
En cromatografía plana (papel y capa fina) el area ocupada por las especies
separadas es el parametro utilizable en analisis cuantitativo.
Las aplicaciones cuantitativas de la cromatografía en columna se basan en la
comparación de la altura o del area del pico del analito con los correspondientes a los
patrones. El empleo de las alturas de pico tiene la ventaja de su facil medida*
, pero
presenta el inconveniente de que debe controlarse rigurosamente la temperatura de la
columna, el caudal de eluyente y la velocidad de inyección de la muestra, ya que estas
variables alteran las anchuras de pico, y éstas estan inversamente relacionadas con las
correspondientes alturas. Sin embargo, el area depico es independiente de los
efectos debidos a las variables anteriormente mencionadas, por lo que es el parametro
que normalmente se utiliza. Su medida se lleva a cabo con facilidad, ya que casi todos
los cromatógrafos modernos estan provistos de integradores electrónicos digitales*
.
Sin embargo, hay que tener en cuenta que la respuesta del detector varía de un
compuesto a otro. Así, por ejemplo, el detector ultravioleta depende de la
absortividad de los correspondientes analitos, y el de ionización de llama de la formación de iones. Por ello, a menudo se utilizan los denominados factores de
respuesta, obtenidos de la relación entre el area de un componente y el area de otro
componente elegido como referencia.
Los métodos de cuantificación que principalmente se utilizan en cromatografía
son las rectas de calibrado obtenidas a partir de series de patrones, el método del
patrón interno, el de normalización de areas y el de adición estandar.
La obtención de rectas de calibrado se lleva a cabo preparando una serie de
disoluciones patrón de composición parecida a la de la muestra, obteniendo los
correspondientes cromatogramas y representando las areas de pico (o las alturas) en
función de la concentración. En este método, la fuente mas importante de error es la
incertidumbre en el volumen de la muestra, sobre todo cuando se utilizan microjeringas. Estos errores pueden reducirse considerablemente con el empleo de valvulas
rotatorias, cuyo funcionamiento se ilustra esquematicamente en la figura 10.17