PRUEBAS BIQUÍMICAS

A.- UTILIZACIÓN DE CARBOHIDRATOS
HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN
Fundamento: Determinar la capacidad de un microorganismos para secretar la enzima amilasa para la degradación de almidón en moléculas mas pequeñas para ser utilizadas en su metabolismo
FERMENTACION DE AZUCARES EN MEDIO TSI.
Detección de fermentadores de glucosa y lactosa en agar de hierro de Kligler (KIA) o agar triple azúcar hierro (TSI).
Fundamento: Este medio sirve para determinar la fermentación de glucosa, sacarosa y lactosa ademas de la producción de gas a partir de glucosa y la producción de acido sulfhídrico que precipita como sulfuro férrico al reaccionar con el hierro, la liberación del acido sulfhídrico se libera por acción enzimatica, de los aminoacidos que contienen azufre produciendo una reacción visible de color negro.

PRUEBA DE ROJO DE METILO
Fundamento: El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6.0 8 amarillo) y 4.4 (rojo), esta prueba es cuantitativa para la producción de acido y requiere de organismos positivos que produzcan acidos lactico, acético, o fórmico a partir de la glucosa, por la vía de la fermentación mixta. Dado que existen muchos microorganismos que producen acidos, sólo se consideran rojo de metilo positivos aquellos organismos que puedan mantener este pH bajo un largo tiempo de incubación (48 -72 horas), contrarrestando el sistema estabilizador de pH del medio (Faddin, 1984)

B.- UTILIZACIÓN DE SALES ORGANICAS
UTILIZACIÓN DECITRATO DE SIMMMONS
Fundamento: Algunos microorganismos pueden suministrar energía en ausencia de la fermentación o producción de acido lactico empleando como única fuente de carbono al citrato Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio si es alcalino se produce mas acetato y formato con una disminución del lactato y CO2 (Faddin, 1984). Por encima del pH de 7 no hay producción de lactato y los productos son CO2 acido formica y acido acético.
HIDRÓLISIS DE UREA
Fundamento: La urea es una diamida del acido carbónico y esta es facilmente hidrolizada con la liberación de amoníaco y dióxido de carbono. La enzima ureasa que posee un microorganismo pueden hidrolizar a la urea que esta presente en el medio de cultivo de acuerdo con la siguiente reacción: el amoníaco reacciona en solución para formar carbonato de amonio, produciéndose una alcalinización y un aumento del pH del medio.
Mediante la realización de esta practica se espera obtener   amplios conocimientos con respecto a los compuestos químicos, al realizar esta practica los conocimientos obtenidos serviran para la clase de química organica, no solo para ella si no para aplicarlo en la vida cotidiana apreciando como la química se involucra a nuestro alrededor día a día por ejemplo: en la comida, la bebida, el calzado, el vestido, la industria, la respiración, la contaminación etc.

3.
4. MARCO TEORICO
Diferencias entre compuestos organicos e inorganicos
COMPUESTOS INORGANICOS:
* sus moléculas pueden contener atomos de cualquier elemento, incluso carbono bajo la forma de CO,CO2 carbonatos y bicarbonatos.
* se conocen aproximadamente unos 500000 compuestos.
* son, en general, 'termo estables' es decir: resisten la acción del calor, y solo se descomponen a temperaturas superiores a los 700ºc.
* tienen puntos de ebullición y de fusión elevados.
* muchos son solubles en h2o y en disolventes polares.
* fundidos o en solución son buenos conductores de la corriente eléctrica: son 'electrólitos'.
* las reacciones que originan son generalmente instantaneas, mediante reacciones sencillas e iónicas.
COMPUESTOS ORGANICOS:
* Sus moléculas contienenfundamentalmente atomos de C, H, O, N, y en pequeñas proporciones, S, P, halógenos y otros elementos.
* El número de compuestos conocidos supera los 10 millones, y son de gran complejidad debido al número de atomos que forman la molécula.
* Son 'termolabiles', resisten poco la acción del calor y descomponen bajo de los 300ºC. suelen quemar facilmente, originando CO2 y H2O.
* Debido a la atracción débil entre las moléculas, tienen puntos de fusión y ebullición bajos.
* La mayoría no son solubles en H2O (solo lo son algunos compuestos que tienen hasta 4 ó 5 atomos de C). Son solubles en disolventes organicos: alcohol, éter, cloroformo, benceno.
* No son electrólitos.
* Reaccionan lentamente y complejamente.
5. MATERIALES
Tabla 1: instrumentación
Table 1: instrumentation

EQUIPO | CANTIDAD |
Gradilla | 1 |
Capilares | 2 |
Termómetro | 2 |
Tubos de ensayo | 5 |
Perlas de vidrio | - |
Beaker | 1- 100 ml |
picnómetro | 1- 25 ml |
Tabla 2: reactivos
Table 2: reagents
SUSTANCIA | CANTIDAD |
Éter | 5 ml |
Tolueno | 5 ml |
Aceite mineral | 100 ml |
Etanol | 30 ml |
Benceno | 30 ml |
Naftaleno | 2 g |
Cloruro de sodio | 2 g |
Parafina | 5 ml |
Agua | - |

6.1 PROCEDIMIENTO
* En la balanza electrónica, pesar el picnómetro seco y limpio con su tapa. Luego agregar agua hasta llenar y tapar. Secar y pesar nuevamente, repetir el procedimiento con etanol y benceno.
* Determinar el punto de ebullición del agua y deletanol, haciendo mediciones cada 2 minutos.
* Tomar una gradilla con 5 tubos de ensayo y verter 2 ml de etanol, benceno, aceite, éter y parafina. Luego se adiciona a cada tubo 2 l de agua. Se repite el ensayo cambiando el agua por tolueno.
* Introducir una pequeña cantidad de cloruro de sodio y naftaleno triturados, en cada capilar, amarrandolos a termómetro. Luego en el beaker 60 ml de aceite mineral y se asegura el termómetro con dos pinzas cuidando que no toque las paredes del vaso. Se calienta y se registra la temperatura.
6. RESULTADOS
Tabla 3: peso
Table3: weight
objeto | peso |
Picnómetro vacio | 23,2253 g |
Picnómetro + agua | 48,211 g |
Picnómetro + etanol | 42,9680 g |
Picnómetro + benceno | 45,0693 |

Calculos de densidad experimental
d= m/v

d agua= 25g/25ml= 1g/ml
d etanol= 19,7g/25ml= 0,7g/ml
d benceno= 21,8g/25ml= 0,872g/ml
Densidades teóricas
Agua= 1g/ml
Etanol = 0,810g/ml
Benceno= 0,87294g/ml
Punto de eb
C.- HIDRÓLISIS DE PROTEÍNAS Y AMINOACIDOS:
PRUEBA EN MEDIO MIO
Es un medio semisólido sirve para leer la movilidad, producción de Indol y descarboxilación de la ornitina. La prueba de movilidad nos sirve para determinar si un microorganismo es móvil por la presencia de flagelos o inmóvil.
La prueba de Indol nos sirve para determinar si un organismo es capaz de desdoblar el indol de la molécula de triptófano (Faddin, 1984).
La prueba de la descarboxilación de la ornitina sirve para determinar la capacidad enzimatica de un microorganismo dedescarboxilarla para formar una amina, con la siguiente alcalinidad del medio. La descarboxilación es un proceso por el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas específicas son capaces de atacar a los grupos carboxilo del aminoacido dando una amina o una diamina y anhídrido carbónico (Faddin, 1984)., la enzima que efectúa esta reacción se llama ornitina descarboxilasa , la cual es una enzima inducida que es formada por el organismo cuando son cultivadas en un medio acido en presencia del sustrato y los productos de la descarboxilación provocan un cambio de pH hacia la alcalinidad.

DESAMINACIÓN Y DESCARBOXILACIÓN DE AMINOACIDOS EN MEDIO LIA.
En este medio se determina la descarboxilación de la lisina que se lleva a cabo en anaerobiosis y la desaminación de la lisina que se lleva a cabo en aerobios.

D.- DETERMINACIÓN DEL METABOLISMO OXIDATIVO Y/O FERMENTATIVO
PRODUCCIÓN DE LA CATALASA
Fundamento: Determinar la presencia de la enzima catalasa, que se encuentra en la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contiene citocromo.
La catalasa es una enzima que se descompone en peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua, químicamente la catalasa es una hemoproteína. El peróxido de hidrógeno se forma como uno de los productos finales del metabolismo oxidativo aeróbico de los hidratos de carbono. Si se deja acumular el peróxido de hidrógeno es letal para la célula bacteriana. La catalasa transforma al peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno en agua.