Benemérita Universidad Autónoma de Puebla.
Facultad de Ciencias Químicas.
3er Semestre en Lic. en Q.F.B.
Laboratorio de Bioquímica.
Número de la Practica: 3
Nombre: “Punto Isoeléctrico de Proteínas”.

Equipo 3

Fecha de Entrega: 10/Octubre/2013.

Calificación

Observaciones:
Índice de Contenidos:
Introducción.
Pagina 3.
Objetivos de la Practica.

Objetivos Particulares.



Material y Reactivos.
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Metodología.
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Observaciones.

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Resultados.
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Discusión
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Preguntas.
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Conclusión.
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Punto Isoeléctrico de las Proteínas.
Introducción:
Las Proteínas son macromoléculas compuestas por unidades de alfa –aminoacidos, que se unen entre sí mediante Enlaces peptídicos, y que alcanzan un peso molecular igual o superior a 5000 D.
El enlace peptídico, característico de estos compuestos, resulta de la reacción del grupo carboxilo de un aminoacido con el grupo amino de otro, lo cual da lugar a un enlace covalente de tipo Carbamida, el cual tiene algunas características peculiares como:

1. El Enlace C-N tiene cierto caracter de doble enlace, por lo cual le confiere rigidez a la molécula.
2. El Oxígeno y el Nitrógeno quedan en posición trans
3. Todos los elementos que componen al enlace se encuentran ubicados en el mismo plano.
4. La Rotación de la molécula formada queda restringida a los Carbonos alfa.
La presencia de Grupos Acido, (-COOH) y Basico, (-NH2)otorga a los aminoacidos propiedades características. En medios acidos fuertes, tanto el grupo amino como el grupo acido se encuentran protonados y el aminoacido tiene la siguiente forma

Al subir el pH, se desprotona el grupo mas acido y de menor pKa, formandose una especie neutra llamada Zwitterión.


Cuando el aminoacido se encuentra en medios basicos, pierde el protón del grupo amino, dando lugar a la especie desprotonada.

Se llama pH Isoeléctrico o Punto Isoeléctrico, al pH en el cual la concentración de Zwitterión es maxima, (el aminoacido no presenta carga neta), es decir, el pH al que la concentración de especies protonadas y desprotonadas se iguala.

Dicho punto se calcula como Media de pKa  y pKa,2, es decir, la media de los pKas de las etapas que forman y descomponen el Zwitterión.

Las Proteínas son solubles en Agua cuando adoptan una conformación globular. La Solubilidad es debida a los radicales (-R) libres de los aminoacidos que, al ionizarse, establecen enlaces débiles, (Puentes de Hidrógeno), con las moléculas de Agua. Así, cuando una proteína se solubiliza queda recubierta de una capa de moléculas de Agua, (Capa de Solvatación) que impide que se pueda unir a otras proteínas, efecto que provocaría su Precipitación, (Insolubilización).
La Solubilidad de una proteína esta influenciada por los siguientes factores:
a) Su Composición en Aminoacidos, (una proteína rica en aminoacidos polares es, en general, mas soluble que una rica en aminoacidoshidrofóbicos);
b) Su Estructura Tridimensional, (las proteínas fibrosas son, en general, menos solubles que las globulares);
c) La Temperatura.
d) La Constante Dieléctrica del medio.
e) El pH.
f) la Fuerza Iónica.
g) El Punto Isoeléctrico.

Objetivo de la Practica

Objetivos Particulares:
Material y Reactivos:
Reactivos:
Materiales:
Caseinato de Sodio. (0.1 N).
9 Tubos de Ensaye.
Gelatina.
Gradillas.
Acido Acético: (CH3COOH).
0.01 N
0.1 N.
1.0 N.
Perilla.
Hidróxido de Sodio: (NaOH; 1.0 N).
Pipetas.
Acetato de Sodio: (CH3COONa; 0.1 N).

Alcohol Etílico: (Etanol; CH3-CH3-OH).

Agua Destilada.


Metodología

Observaciones:
Resultados:
Discusión de Resultados:
Preguntas:
A. Defina Punto Isoeléctrico de una Proteína:
El Punto Isoeléctrico, (IEP o pI), es el punto donde ocurre un equilibrio entre las cargas de los Grupos Amino y los Grupos Carboxilo; es decir, es el pH en el cual las cargas positivas igualan a las negativas. Con la disminución del pH, tenemos la disociación de los grupos amino, mientras que con su incremento, el grupo carboxilo sufre la disociación. 
En el Punto Isoeléctrico, la proteína sera eléctricamente neutra, y no tendra movimiento dentro de un Campo Eléctrico, pues su carga neta tendra un valor de cero.
El pH Isoeléctrico generalmente posee un valor de aproximadamente 5.0.
B. Escriba la Ecuación de Henderson Hasselbach

C. ¿Por qué el alcohol actúa como Agente Precipitante para la Gelatina?
Conclusión: