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Extraccion de papaina - metodologia experimental



METODOLOGIA EXPERIMENTAL
Fase I: Estudio de los diferentes métodos para la extracción y la purificación de papaína a partir de lechosa.
Se analizaran diferentes métodos para la obtención de papaína a partir de lechosa en todos sus estados de maduración.
Algunos procedimientos descritos para purificar papaína a partir de lechosa son: método de precipitación de la sal en 2 pasos, método de extracción en un sistema acuoso de 2 fases. Para la refinación se realizara la descripción del procedimiento de dialisis, mientras que para la cuantificación se describiran los métodos de Biuret, Bradford, Lowry y el procedimiento N°971.16 de la A.O.A.C
Fase II: Selección del método experimental mas apropiado para la purificación de la papaína.


Fase III: Caracterización de las propiedades físico-quimicas de las muestras de lechosa.
Se analizaran las muestras por duplicado, separando las muestras en A y B para cada uno de los estados de maduración.
Para cada muestra se realizaran los siguientes analisis por duplicado
Determinación del pH
Se colocaron las muestras en vasos precipitados y se midió el pH con un pHmetro.
Determinación de solidos solubles.
Para esto se utilizó un refractómetro portatil, que expresa los resultados en °Brix.
Determinación de % de humedad
Se pesaron 1 – 2gde muestras en crisoles secados y pesados.
Se colocaron en una estufa a 105 – 110°C por 5 hrs para obtener peso constante.
Se enfriaron las muestras en un desecador y se pesaron al alcanzar la temperatura ambiente.
Se calculó el % de materia seca con

Se calculó el % de contenido de humedad por diferencia:

Determinación del contenido de ceniza:
Se colocaron los crisoles limpios en el horno de incineración a 550°C durante 1 hora.
Luego se trasladaron los crisoles al desecador y se enfriaron a la temperatura ambiente.
Se pesaron 1-2g de muestra en los crisoles y se colocaron de nuevo en el horno incinerados a 550°C durante 5hrs.
Se trasladaron los crisoles a una estufa a 105°C y se dejaron por 1 hora

¿Por qué no hacemos mejores preguntas?
Si el hacer buenas preguntas es tan crítico, por qué la mayoría de nosotros no usamos mas de nuestro tiempo y energía en descubrirlas y mejorarlas? Una razón puede ser que mucho de la cultura Occidental, y la sociedad Norteamericana en particular, se enfoca en tener la “respuesta correcta” en vez de descubrir la “pregunta correcta.” Nuestro sistema educacional se enfoca mas en memorización y repetición de respuestas que en el arte de buscar nuevas posibilidades. Raramente se nos dice que descubramos nuevas preguntas, tampoco se nos enseña porqué deberíamos hacer tales preguntas en primer lugar. Examenes, y examenes de aptitud todos refuerzan el valor de lasrespuestas correctas. ¿Es de extrañarse que la mayoría de nosotros estamos incómodos con no saber? La aversión en nuestra cultura a hacer preguntas creativas esta ligada a un énfasis en encontrar soluciones rapidas y un apego al pensamiento blanco/negro, esto/o aquello. Ademas, el paso rapido de nuestras vidas y trabajo a menudo no nos brinda con oportunidades de participar en conversaciones reflectivas en las que podemos explorar preguntas catalizadoras y posibilidades innovadoras antes de llegar a decisiones claves. Estos factores, junto con una creencia prevaleciente de que el “verdadero trabajo” consiste principalmente en analisis detallado, decisiones inmediatas, y acción decisiva, contradicen la perspectiva que el “trabajo de conocimiento” efectivo consiste en hacer preguntas de fondo y recibir una gran variedad de conversaciones estratégicas sobre temas de sustancia. Los sistemas de recompensa en nuestras organizaciones ayudan a reforzar este dilema. Los Líderes creen que son pagados por arreglar problemas en vez de para crear pensamiento innovador. Entre nuestra profunda unión a la respuesta—cualquier respuesta—y nuestra ansiedad de no saber, hemos, sin darnos cuenta, destruido nuestra capacidad colectiva para la creatividad profunda y las perspectivas nuevas. Desafortunadamente, dados los desafíos sin precedencia que encaramos en nuestras organizaciones y como una comunidad global, necesitamos estas habilidades ahora mas que nunca. ¿Hay organizaciones que sí le dan un valor alto a las preguntas? Considere esto: En Alemania, el título Direktor Grundsatzfragen se traduce como “Director de PreguntasFundamentales.” Como dijo un colega Aleman:

“Si, hay un título de trabajo de Direktor Grundsatzfragen. Algunas de las compañías Alemanas mas grandes tienen un departamento entero de Grundsatzfragen. Estas son las personas que siempre estan pensando sobre cuales van a ser las siguientes preguntas. Por supuesto, estas personas solamente estan en las compañías Alemanas con oficinas principales en Alemania, tales como Daimler, Bayer, Siemens, o SAP. Si la compañía Alemana es adquirida por una compañía de U.S., normalmente eliminan los puestos de Grundsatzfragen.”

El entendimiento Aleman y apreciación de Grundsatzfragen puede surgir de una cultura que valora la filosofía y el continuo cuestionamiento de prioridades y el significado de la vida. Hasta hoy en día, este enfoque se refleja en algunos aspectos únicos de educación secundaria. En el Gimnasio Aleman desde la edad de 14 hasta 17, a los estudiantes normalmente se les asigna a grupos de estudio con 30 de sus compañeros. En las palabras de un graduado, “Trabajamos intensamente juntos en cada tema, y luego en el segundo año, conocemos a Goethe (el famoso filósofo Aleman del siglo 19), y cuestionamos nuestro mundo entero por dos años. Surgimos con una mayor apreciación del poder de preguntar y el poder de conversar.” A como entramos una era en la que los asuntos sistémicos con frecuencia se encuentran a la raíz de los desafíos críticos, en la que perspectivas diversas se requieren para soluciones sostenibles, y en la que relaciones de causa-y-efecto no son inmediatamente aparentes, la capacidad de presentar preguntas capciosas que desafían supuestos de operativos actualesPREGUNTAS IMPACTANTES Y RESULTADOS CLAVES
Quién Pregunta Resultado
Watson y Crick “¿Como se ve el ADN en 3 dimensiones?” Descubrimiento de la doble helix
James Burke, CEO, “¿Cual es la acción con mas ética que se puede tomar?” Restituir la
Johnson & Johnson confianza del consumidor
Ray Kroc “¿Adonde puedo conseguir una buena hamburguesa en el camino?”Creació Se colocaron de nuevo al desecador hasta alcanzar la temperatura ambiente y se anotó el peso.
Por último, se obtuvo el % de cenizas con

Fase IV: Cuantificación de la concentración de papaína en la lechosa a diferentes estados de maduración.

Fase IV: Cuantificación de la papaína en la lechosa en diferentes estados de maduración.
Se presenta la relación entre la absorbancia que es la cantidad de luz absorbida por la muestra, y la concentración en términos de gramos por litro. Se observa un comportamiento lineal.

Fase V: Comparación de las concentraciones de papaínaen relación a los diferentes estados de maduración de la lechosa.

Se observa una tendencia descendente para los valores de concentración con respecto a la maduración de la lechosa. Se puede decir que mientras mas cercana a su maximo estado de maduración, la lechosa contiene menos cantidad de papaína y se aclara que la enzima papaína si esta presente en las pulpas de lechosas aunque en pocas concentraciones.

Ademas cabe recalcar que mientras la lechosa se encuentre mas verde contiene una cantidad considerable de papaína, la cual disminuye a medida que el fruto madura, pero no desaparece.
En las muestras analizadas se tomaron aproximadamente 60grs de pulpa de cada estado de maduración de las lechosas, y se obtuvieron resultados de concentración de papaína en un aproximado de 0.23g/l para las lechosas maduras en estado 6, lo que representa un 0.375% de la totalidad de la pulpa estudiada. También se determinó que, comparado con el estado 1, en el estado 6 hubo una disminución del 90.98% en la concentración de papaína, lo que quiere decir que se perdió una gran cantidad de la enzima pero la misma no desapareció. Tomando en cuenta que en el estado 6 es donde la fruta es consumida normalmente, se puede decir, que si brinda los beneficios a la salud por los cuales es tan conocida.


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