Practica de cuenta diferencial
de leucocitos
CUENTA DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS UTILIZANDO LA
TINCIÓN DE WRIGHT
OBJETIVO
El alumno realizara la Cuenta diferencial de Leucocitos utilizando la tinción
de Wright, identificando los diferentes tipos de glóbulos blancos en sangre
periférica.
INTRODUCCION.
El término citrometría hemática parece ser el más adecuado para referirse la
medición de las células de la sangre (citos=celula; metros=medida; haema,haematos= a sangre). Es el que mejor describe al estudio de
laboratorio destinado a informar sobre el número y las
características de las células de la sangre. La interpretación correcta de toda
la información que ofrece una CH permite establecer sospechas diagnosticas
definidas sobre la enfermedad que causa las alteraciones de la misma. La
interpretación correcta de la CH supone el análisis detallado de cada uno de
los datos que informa, los cuales pueden dividirse en tres grandes grupos:
datos de la serie roja, de la serie trombocítica y la serie blanca,
que abordaremos en esta práctica. (1
SERIE BLANCA.
Los datos que la CH proporciona son: número de glóbulos blancos, cuenta
diferencial y alteraciones de los mismos.
El número de leucocitos depende de muchos factores, como edad, peso,
hábito tabáquico, consumo de hormonas anticonceptivas, etc. Para adultos, los valores de
referencia oscilan entre 4y 12 X 109 /L Se habla de leucocitos y cuando se
encuentra por debajo de 4 X 109/L de leucopenia. Dentro
de las causas de leucopenia, pueden señalarse las infecciones bacterianas.
Algunos medicamentos pueden originar también leucopenia, así como las radiacionesionizantes 2)
CUENTA DIFERENCIAL DE GLOBULOS BLANCOS.
Hacer la cuenta diferencial de las variedades de glóbulos blancos es de gran
importancia en la CH, normalmente, en sangre periférica pueden encontrarse los
siguientes tipos de leucocitos: neutrófilos o polimorfonucleares (incluye las
formas con núcleo segmentado, las de núcleo “en banda” y los metamielocitos),
eosinofilos, basófilos linfocitos y monocitos. (3
El recuento diferencial evalua la distribución y la morfología de loa globulos
blancos, y de este modo, aporta información mas especifica respecto al sistema
inmunitario de los pacientes con el simple recuento de tales células. En este estudio de laboratorio clasifica 100 o mas leucocitos
en un frote de sangre teñido. La ventaja que tiene esta preparación de sangre
estendida y coloreada, es importante para el diagnosticoclinicoya que se
observan los diferentes tipos de leucocitos, con los que se establece el conteo
difrencial, también nos puede informar sobre la presencia de anormalidades
morfológicas en ellos que puede ser de considerable pronostico y significación
diagnostica. (4
Enseguida se presentan los diferentes tipos de leucocitos:
• NEUTROFILOS.
Cuando la cifra de neutrófilos absolutos es de 1.5 X 109/L,
se habla de neutropenia; cuando la cantidad es mayor a 7.0 X 109/L, se habla de
neurofilia. (5
• EOSINÓFILOS.
Existen varias causas de eosinofilia (enfermedades alérgicas, infestaciones por
parasitos, enfermedades infecciosas, padecimientos cutáneos, enfermedades
gastrointestinales, enfermedades hematológicas.) se describe que los pacientes
con síndrome de Cushingtienen eosinopenia, pero, si se acepta que es normal que
en una cuenta diferencial no haya eosinófilos.
• BASÓFILOS.
Las causas de basofilia son leucemia mieloide crónica, polisitemia vera,
metaplasia mieloide, enfermedad de Hodgkin, anemía hemolítica crónica , sinusitis crónica, varicela, mixedema, síndrome
nefrotico, el posoperatorio a esplenectomía, etc.
• LINFOCITOS.
Las causas de linfocitosis son varias casi todas infecciosas.
(6
• MONOCITOS.
Cuando la cuenta absoluta de monocitos excede de 500/uL (0.5 X 109/L) se habla
de monocitosis cuyas causas son : leucemias, tuberculosis metaplacia mieloide
acnogénica, polisitemia vera, enfermedad de Hodking linfomas malignos,
teusarismosis, recuperación de daño medular por radiaciones o por medicamentos,
paludismo, kala-azar, tripanosomiasis, rickettsiasis, endocarditis infecciosa,
brucelosis, colitis ulcerosa, enteritis regional, sarcoidosis, padecimientos
autoinmunitarios, etc. (7)
MATERIAL:
Jeringa y aguja
Ligadura
Algodón con alcohol
Portaobjetos
Puente de coloración
Colorante de Wright
Buffer de fosfatos pH 6.4
Aceite de inmersión
Microscopio
METODO:
1.- Seleccionar un portaobjetos nuevo de 25 x 75 mm para hacer extendidos, que
tenga la orilla relativamente lisa.
2.- Colocar una pequeña gota de sangre en la orilla de
un portaobjetos limpio y seco. Colocar el portaobjetos para hacer un extendido en un ángulo de 30 a 45 grados con respecto al
portaobjetos que tiene la muestra y hacer contacto con la gota. Esta debe
extenderse rápidamente a lo largo de la orilla del portaobjetos
para hacer los extendidos. Deslizar elportaobjetos de
extensión sobre la superficie dispersando la muestra de sangre. El
portaobjetos de extensión no se despegará hasta haber
extendido toda la sangre. El grueso del
extendido de sangre puede regularse modificando el ángulo del portaobjetos extensión, variando el
tamaño de la gota de sangre, la presión o la velocidad de extensión.
3.- El extendido de sangre se seca al aire. Una vez
seco, se escribe con lápiz el nombre del
paciente en una orilla del
portaobjetos.
4.- Cubrir el portaobjetos completamente con el
colorante de Wright, dejándolo 5 minutos (el tiempo varia en cada lote de
colorante).
5.-añadir el amortiguador y, sin tirar el colorante, soplar
ligeramente para mezclar uniformemente. Dejar 7 minutos (aparecerá un brillo metálico verde), (el tiempo varía en cada lote de
colorante).
6.- Enjuagar cuidadosamente con agua de la llave ó
amortiguador de fosfatos, para eliminar todo el exceso de colorante.
7.- Dejar secar al aire en posición inclinada.
8.- Limpiar con un algodón con alcohol la parte
posterior del
portaobjetos para quitar el exceso de colorante.
9.- Observar en el microscopio con objetivo de
inmersión e identificar cuando menor 100 Leucocitos y reportar estos valores en
porcentaje.
NOTA!: durante la realización de esta practica existió controversia en base a
los tiempos de tinción por lo que se decidió que cada mesa ocuparía uno
distinto, a la mesa 1 le correspondió 6 minutos con colorante de Wright y 3
minutos con sol. Buffer.
RESULTADOS
Los resultados esperados en la tinción serán los siguientes:
ï¶ Hematíes en color rosa
ï¶ Núcleos de los Leucocitos de azulpurpura, con la cromatina y netamente
diferenciadas.
¶ Gránulos neutrófilos del citoplasma, lila ó violeta.
¶ Gránulos eosinófilos, rojo tirando a naranja
ï¶ Gránulos basófilos, púrpura tirando a naranja
ï¶ Plaquetas, color lila oscuro.
¶ Citoplasma de los linfocitos, azul claro.
¶ Citoplasma de los monocitos, ligero azul.
Tipo de error Causas Como se corrige
Tinción demasiado azul Tiempo excesivo de tinción, lavado deficiente, pH muy
alcalino. Disminuir el tiempo de tinción. Lavar adecuadamente Acidificar el pH.
Tinción demasiado rosa
Tiempo insuficiente de la tinción, lavado excesivo y pH muy acido. Aumentar el tiempo de tinción. Lavar adecuadamente
Elevar el pH.
Precipitación de colorante Colorante no filtrado, secado de lámina durante la tinción. Filtrado de colorante.
Procurar que siempre hay un buen menisco. Colorante
durante la tinción
• Esta imagen muestra un buen extendido de sangre:
Al finalizar el conteo de la serie blanca obtuvimos:
V. relativos V. absolutos
• Neutrófilos totales 55% 4937
N. segmentados 52% 4668
N. banda 3% 269
• Linfocitos 33% 2962
• Monocitos 9% 808
• Eosinófilos 2% 179
• Basófilos 1% 89
(8)
VALORES DE REFERENCIA
Células Valores
Relativos (%) Valores
Absolutos (/mm3
Neutrófilos totales 40-65 2,500-7,000
N. segmentados 40-65 2500,-7,000
N. banda 0-2 0-200
Linfocitos 20-45 1,500-4,500
Monocitos 0-9 200-800
Eosinófilos 0-4 40-440
Basófilos 0-1 0-100
DISCUSION:
Como ya se
menciono alprincipio, existió una controversia en base a los tiempos de tinción
para Wright, pues en la práctica proporcionada por el profesor venían
establecidos tiempos de 5m. para el colorante y 7 para
la sol. Buffer, una compañera investigo un poco y encontró otros tiempos para
la tinción, con esto se decidió hacer una variación de tiempos para comprobar
cuál era la más prudente y conveniente en esta práctica.
Los resultados fueron:
Mesa Tiempo
Wright Tiempo
buffer Visión
De células
1 6 3 Clara y consistente además de fácil identificación celular
2 3 2 Clara
3 5 5 Clara
4 5 3 Clara
5 6 5 No se observa nítido ni definido.
6 5 7 No se observa claro, y en cuestión de tiempo es
demasiado.
CONCLUSION
o En base a los tiempo de tinción podemos concluir que la mejor opción para
realizar el procedimiento son los tiempo de la mesa 1, ya que las células se
veían sumamente claras, su identificación era rápida y
sencilla. Aprendimos que los tiempos de coloración no pueden ser los mismos en
todos los casos, pues estos tiempos depende de las condiciones del colorante y el lote del fabricante.
o Por otro lado, en el conteo diferencial de
leucocitos nuestro paciente presento un ligero aumento con relación a los
neutrofilos en banda con 69 celulas arriba de lo normal y 8 células arriba de
lo normal en lo que a monocitos se refiere.
Al registrar aumento de neutrofilos indica presencia de una bacteria y los
monocitos de un hongo, pero este aumento es mínimo, casi insignificante, por
tanto no creemos que se trate de una patología como tal, más bien creemos que
estas variaciones se deban a otrosfactores como: el tipo de alimentación, la
edad, complexión, altitud en relación al nivel de mar, etc.
ANEXOS
Imágenes
Neutrofilos en banda (9) Neutrofilo segmentado (10
Linfocito (11) Monocito (12)
Eosinofilo (13) Basofilo (14)
BIBLIOGRAFIA
(1) Fundamentos de hematologia, 3era. Edicion, G. Ruiz Arguelles, editorial
medica Panamericana, 200. Pág. 45
(2) Fundamentos de hematologia, 3era. Edicion, G. Ruiz Arguelles, editorial
medica Panamericana, 200. Pág. 54
(3) Fundamentos de hematologia, 3era. Edicion, G. Ruiz Arguelles,
editorial medica Panamericana, 200. Pág. 55
(4) Manual de practicas de laboratorio, hematologia 1. Biologa Lucina
Taboada Torres Pág. 46
(5) Fundamentos de hematologia, 3era. Edicion, G. Ruiz Arguelles,
editorial medica Panamericana, 200. Pág. 56
(6) Fundamentos de hematologia, 3era. Edicion, G. Ruiz Arguelles,
editorial medica Panamericana, 200. Pág. 57
(7) Fundamentos de hematologia, 3era. Edicion, G. Ruiz Arguelles,
editorial medica Panamericana, 200. Pág. 58
(8) Manual de practicas de laboratorio, hematologia 1. Biologa Lucina
Taboada Torres Pág. 48
