PRACTICA No. 04 – diversidad microbiana

Tematicas de la practica Observación de bacterias, hongos y algas y protozoos. Propósito
Aprender a identificar microorganismos de las diversas clases taxonómicas.
Objetivo
• Reconocer en placas de cultivo diferentes tipos demicroorganismos, en especial Colonias de bacterias y hongos.
• Conocer y aplicar la técnica de tinción de Gram
• Identificar bacterias Gram positivas y Gram negativas
• Observar microscópicamente mohos y levaduras.
• Observar microorganismos de fermentación acido lactica y fermentación alcohólica a partir del kumis o yogurt.

• Observar protozoarios y algas en muestras de agua
Meta
Identificación correcta de los microorganismos observados al seguir las instruciones de la guía de laboratorio.
Competencias
• Elaborar montajes de microorganismos para observarlas al microscopio
• Reconocer en diferentes habitats y sustratos la diversidad biológia de microorganismos
• Realizar frotis fijo con tinción de Gram

Descripción de la practica
A través de esta practica el estudiante podra realizar una descripción macroscópica de las colonias bacterianas y de hongos, de microorganismos como protozoos y micro algas, ademas de adquirir destrezas en técnicas de tinción.

MATERIALES
Yogur casero o probiótico, Agua estancada, Tajada de pan y/o fruta con moho (dejarlo 2 en un sitio húmedo y oscuro mínimo 2 semanas antes de la practica). Levadura de Panadería. Laminas portaobjetos y laminillascubreobjetos. Hisopos. Asas microbiológicas: recta y de argolla. Fósforos. Guantes de nitrilo, tapabocas N95 y gorro. Cinta adhesiva transparente. Lapices de colores, Cultivos de diversos hongos y bacterias en cajas de petri. Solución salina, Agua destilada, Coloración de Gram (cristal violeta, lugol, alcohol acetona y fucsina) Lactofenol, Azul de Metileno, Alcohol, Aceite de inmersión, Mechero, Asa recta y de argolla. Microscopio.

Procedimiento
OBSERVACIÓN DE BACTERIAS
Procedimiento:
2. Elaboración del frotis bacteriológico
A partir de una de las colonias de los cultivos dados realice un frotis de la siguiente manera:
1. Tome una lamina portaobjetos limpia y en ella coloque una gota pequeña de solución salina.
2. Con un asa previamente esterilizada a la llama del mechero, obtenga una muestra de una de las colonias observadas. Mezcle la muestra en la gota de solución salina que coloco en el portaobjetos.
3. Déjela secar al temperatura ambiente y fíjela pasandola por la llama del mechero.
Posteriormente proceda a colorear con la tinción de gram de la siguiente manera:

COLORACION DE GRAM desarrolle el siguiente diagrama de flujo antes de su ingreso al laboratorio
1. Cubra la preparación con cristal violeta durante 1 minuto. Lave con agua corriente.
2. Cubra la preparación con lugol y déjelo actuar por 1 minuto. Lave con agua corriente.
3. Agregue alcohol acetona y déjelo actuar por 15 segundos. Lave con agua corriente.
4. Adicione fucsina y déjelaactuar por 30 segundos. Lave con agua corriente y ponga a secar la lamina.
5. Ubique la lamina en el microscopio, localice las bacterias con el objetivo de menor aumento y observe en con
el objetivo de 100 X, no olvide colocar una pequeña gota de aceite de inmersión.
6. Según sus observaciones clasifique las bacterias observadas según su forma, agrupación y tinción.
BACTERIAS DE LA CAVIDAD BUCAL
1. Prepare una lamina portaobjetos limpia y sin grasa.
2. Tome un escobillón desechable, paselo por el borde de la encía en la parte que hace contacto con los dientes.
3. La muestra extraída con el escobillón colóquela sobre una lamina portaobjetos.
4. Deje secar por sí sola la lamina durante unos minutos con el fin de definir el frotis.
5. Pase lentamente el portaobjetos a través de la llama del mechero, con esto se fija el frotis.
6. Deje enfriar y coloree con la tinción de Gram como se indicó anteriormente.
7. Deje secar la lamina y ubique las células con el objetivo de menor aumento y luego observe con el objetivo de inmersión.
8. Tenga en cuenta que las bacterias Gram positivas toman coloración violeta y las Gram negativas coloración roja.
9. Escriba todas sus observaciones
BACTERIAS DEL YOGUR
1. Tome una lamina portaobjetos y en ella coloque una gota de agua destilada.
2. Con un asa de argolla, obtenga una gota de yogur y mézclela con la gota de agua colocada en el portaobjetos.
3. Deje secar completamente la lamina. Pasela 3 veces porla llama del mechero. Tenga cuidado de no sobre calentar la muestra.
4. Cubra la preparación con alcohol o metanol por unos segundos para eliminar la parte grasa.
5. Escurra el alcohol y deje secar al aire. Luego cubra el extendido con azul de metileno durante 2 minutos. Lave
el exceso de colorante y deje secar. 6. Enfoque el microscopio con el objetivo de mayor aumento e identifique los estreptococos y los lactobacilos.
Anote sus observaciones.
Observación de mohos
1. Prepare una solución de agua azucarada y agregue 20 gotas de esta a una tajada de pan, déjela por espacio
de media hora al aire libre.
2. Almacénela en una bolsa plastica y ciérrela. Guardela en un lugar oscuro a 30°C y obsérvela di ariamente.
3. Cuando el pan esté enmohecido, coloque en un portaobjetos una pequeña gota de solución de Azul de lactofenol.
4. Luego con un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2 cm toque la superficie del pan enmohecido.
5. Pegue la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.
Elimine el colorante sobrante con un papel de filtro.
6. Observe al microscopio con objetivo de 10X y 40X e identifique el micelio y las hifas.
El procedimiento anterior también puede hacerlo con frutas u hortalizas dañadas que presenten en su superficie mohos. Escriba sus observaciones.
Observación de levaduras:
IVAN ES MUY FEO Y TIENE CARA DE JULIANA Y DE PERRO Y DE MICO Y DE BURRO COCHINO JAJAJAJJAJAJAJ ES TOTALMENTE IMUNDO JAJAJJAAJAJ ATT:MOTAS