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MUESTREO DEL AIRE - Técnica de sedimentación por gravedad, filtración, impacto sobre superficies sólidas, borboteo en líquidos



MUESTREO DEL AIRE

—Técnica de sedimentación por gravedad
El método de sedimentación en placa Petri ha sido el más ampliamente utilizado desde que Frankland y Hart lo emplearan por primera vez en 1887. Las placas con medio de cultivo estéril, permanecen abiertas durante determinados períodos de tiempo, permitiendo la sedimentación de los microorganismos. Este método es sencillo y económico. Tiene la ventaja de que se pueden identificar de los cultivos los microorganismos viables, pero su interpretación es difícil porque no pueden relacionarse con el volumen de aire muestreado. La deposición varía con el tamaño y forma de los microorganismos, la velocidad y la turbulencia del aire. El método no es cualitativa ni cuantitativamente exacto y nos detecta principalmente los microorganismos que más persisten en el aire, no detectándose, sin embargo, los microorganismos más pequeños.



— Filtración
La filtración se realiza a través de un material poroso, fibra de vidrio, alginato
o filtros de membrana (éstos son los más utilizados en la actualidad). Los filtros recogen los microorganismos por sedimentación, impacto, difusión o atracción electrostática, dependiendo del tipo.Los filtros de membrana utilizados son de policarbonato, ésteres de celulosa o cloruro de polivinilo, con un diámetro de poro desde 0,01 a 10 aŽ§m, según la naturaleza de los bioaerosoles. Para realizar la filtración se han diseñado aparatos portátiles con una bomba de vacío y un flujo de aire de 1 a 50 litros por minuto (Millipore). Entre los problemas que destacan, encontramos la pérdida de viabilidad de las células vegetativas debido a la desecación durante el muestreo. En las muestras obtenidas en los filtros de membrana se pueden estudiar los microorganismos por microscopía o por cultivo, colocando los filtros en medios de cultivo sólidos, para determinar el número de colonias.

— Impacto sobre superficies sólidas
Esta técnica es la más usada en la actualidad, los microorganismos se separan de la corriente de aire utilizando la inercia para forzar su sedimentación sobre las superficies sólidas. El proceso de impacto depende de las propiedades de inercia de la partícula ( tamaño, densidad y velocidad) y de las propiedades físicas del aparato tales como las dimensiones de la boquilla y el recorrido del flujo de aire. Se han diseñado una gran variedad de aparatos que difierenpor el número de boquillas o impactores, y por el tamaño, así como el número de pasos o etapas por las que pasa el aire. En la mayoría de ellos, los microorganismos quedan retenidos sobre un medio de cultivo sólido contenido en: placas de Petri de distinto tamaño, 65 o 90 mm (bioMérieux), 100 mm (Andersen y Burkard) y 150 mm (Casella), en tiras de plástico (Biotest) y en placas de contacto de 55 ó 84 mm (SAS y Microflow). Después de la incubación, podemos



I-3 ¿Quiénes pueden ser considerados como partes agraviadas en la hipótesis del artículo 373 letra a del Código Procesal Penal?

En relación con los conceptos recientemente dados es que se ha generado una controversia en cuanto a determinar quiénes pueden ser considerados parte agraviada y por tanto legitimados activos, para recurrir de nulidad. En términos generales podemos señalar que podran recurrir de nulidad todas aquellas personas que sufran agravio a causa de una sentencia judicial dictada en el marco de un proceso penal. De acuerdo con el artículo 372 del Código Procesal Penal, a través de este recurso, se puede solicitar tanto la invalidación del juicio oral y de la sentencia, como la invalidación de la sentencia solamente.
En la actualidad, y a raíz de la reforma procesal penal, que incluye como parte del proceso (susceptible de sufrir agravio) al Ministerio Público, se ha generado una la discusión en torno a la posibilidad de que éste en su calidad de parte interponga recurso de nulidad, basandose en la causal establecida por el artículo 373 letra a del Código Procesal Penal. La doctrina nacional se encuentra divida como veremos a continuación.

II Desarrollo

II-1 Opinión Doctrinal

Previo a revisar las distintas posiciones de la doctrina, es preciso diferenciar la legitimidad activa para el caso de la nulidad procesal y para el caso delrecurso de nulidad propiamente tal.

Legitimación activa Nulidad Procesal

En opinión del profesor Maturana, los requisitos para solicitar la nulidad procesal son los siguientes:

1) Quién lo intente debe ser interviniente en el proceso; Artículo 352 del nuevo Código Procesal Penal: “Podran recurrir en contra de las resoluciones judiciales el ministerio público y los demas intervinientes agraviados por ellas, sólo por los medios y en los casos expresamente establecidos en la ley”
2) Debe haber sufrido un agravio con la dictación de la sentencia pronunciada en el proceso
3) Debe el recurrente haber experimentado un perjuicio con el vicio en que se funda el recurso, consistente en la privación de algún beneficio o facultad procesal dentro del proceso, o con la infracción de la ley que se incurre en la sentencia.
4) El recurrente debe haber reclamado del vicio que lo afecta ejerciendo oportunamente y en todos sus grados los recursos que establece la ley, es decir se debe preparar el recurso.

Por otro lado, y en opinión de los profesores María Inés Horwitz y Julian López, la nulidad puede ser solicitada en términos generales, es decir como nulidad procesal y no como recurso de nulidad, tanto por quien resulte perjudicado, como por el tribunal de oficio. El tribunal podra promover el incidente de nulidad procesal en aquellos casos en que la infracción hubiere impedido el pleno ejercicio de las garantías y de los derechos reconocidos en la constitución o enla demas leyes de la República, todo lo que se extrae del artículo 163 del Código de Procedimiento Penal.

Legitimación activa en el nuevo Recurso de Nulidad

En relación con el recurso de nulidad propiamente tal, estos mismos profesores tratan del tema en los siguientes términos: “En general la legitimación activa del recurso de nulidad se concede a todos los intervinientes, de conformidad con lo dispuesto por el artículo 352 del Código Procesal Penal” y mas adelante señala “Se ha planteado, sin embargo, el problema de determinar si puede el ministerio público interponer recursos de nulidad fundados en la infracción de derechos o garantías, o si, por el contrario su posibilidad de ejercer tal recurso se encuentra limitada a la hipótesis de errónea aplicación del hacer el recuento e identificación de los microorganismos.
Basados en estas técnicas, actualmente existen en el mercado aparatos fácilmente transportables que se alimentan con pilas para tomar muestras de campo, como el muestreador centrífugo Reuter RCS Plus (Biotest), el Air Ideal (bioMérieux) o los sistemas SAS y Microflow. El flujo de aire varía en los distintos aparatos, desde 10 hasta 700 litros por minuto (Buttner et al. ).

— Borboteo en líquidos
El fundamento es similar al impacto sobre medios sólidos y la fuerza de inercia es esencial para separar los microorganismos contenidos en el aire y que se depositen en el medio líquido.El flujo de aire puede ser de 12,5 ó 20 litros por minuto. Este método tambiénrequiere una bomba de vacío. Estos dispositivos, también llamados de «trampa líquida», hacen pasar el aire mediante un aspirador, a través de líquidos (generalmente soluciones tampón diluidas) que retienen los microorganismos. Este líquido puede sembrarse en placa para determinar el número de microorganismos, examinarse microscópicamente (May y Harper, 1957) o analizarlo con ensayos bioquímicos para determinar endotoxinas(LAL), sondas genéticas, reacción en cadena
de la polimerasa (PCR) inmunoensayo y por citometría de flujo (Buttner et
al., 1997). No existe un método de muestreo de aire ideal para todas las necesidades, por lo que para elegir uno deberemos considerar qué queremos investigar y qué información necesitamos, es decir, deberemos determinar previamente si nos interesa saber el número total de microorganismos o sólo el de viables, si deseamos identificarlos y cultivarlos o sólo observar su morfología microscópicamente, si queremos detectar todos los presentes o sólo los patógenos, etc.
En función de estas premisas, elegiremos el más adecuado a nuestras necesidades, por lo que es muy frecuente la utilización de varios métodos para poder alcanzar el objetivo propuesto.




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