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Identificacion de macromoleculas



IDENTIFICACION DE MACROMOLECULAS
INTRODUCCION
Las macromoléculas son moléculas que tienen una masa molecular elevada, formadas por un gran número de átomos. Generalmente se pueden describir como la repetición de una o unas pocas unidades mínimas o monómeros, formando los polímeros.
Macromolécula se refiere a las moléculas que pesan más de 10.000 Dalton de masa atómica. Pueden ser tanto orgánicas como inorgánicas, y algunas de gran relevancia se encuentran en el campo de la bioquímica, al estudiar las biomoléculas. Dentro de las moléculas orgánicas sintéticas se encuentran los plásticos. Son moléculas muy grandes, con una masa molecular que puede alcanzar millones de UMAs que se obtienen por las repeticiones de una o más unidades simples llamados 'monómeros' unidos entre sí mediante enlaces covalentes.


Naturales Caucho, Polisacáridos (almidón - celulosa), Proteínas, Ácidos nucleicos, Carbohidratos, Lípidos
Artificiales Plásticos, Fibras textiles sintéticas, Poliuretano, Polietileno, Cloruro de polivilino , Politetrafluoroetileno
Según su estructura molecular Lineales, Ramificados
Según su composición
Homopolímeros: un monómero.
Copolímeros: dos o más monómeros.
Por su comportamiento ante el calor
Termoplásticos: se reblandecen al calentar y recuperan sus propiedades al enfriar.
Termoestables: se endurecen al ser enfriados de nuevo por formar nuevos enlaces.
OBJETIVO
El alumno indicara la presencia de macromoléculas en diferentes alimentos.

MATERIAL
 6 tubos de ensayo
 Pinzas para tubo deensayo
 Gradilla
 Baño maria
 Pipetas
 Propipetas
 Tripie
 Tela de asbesto
 Vaso de presipitado
 Mechero de bunsen
 Dextrosa al 1%
 HNO3 consentrado
 NaOH concentrnaado
 CuSO4
 Reactivo de Benedict
 Cristales de difenilamina al 2%
 Sudan III
 Èter
 Agua destilada
 Albùnia de huevo
 Levadura activa (1 gr de levadura activa en 20 ml de agua)
 Aceite vegetal
 Cacahuates molidos
 Mortero con pistilo

MÈTODO

Carbohidratos
A. En un tubo de ensayo vierta 3 ml de solución de glucosa (dextrosa al 1%), agregue 1ml de reactivo de Benedict, sostenga el tubo de ensayo con una pinza y caliente ligerament en la flama de un mechero, hasta que adquiera un color rojo ladrillo.

proteínas
B. Reaccion antoproteica. En un tubo de ensayo vierta 2 ml de albúnia y agregue 1ml de HNO3 concentrado. Observe la formación de un precipitado blanco, caliente el tubo con cuidado y observe cómo el presipitado se vuelve amarillo. Enfríe el tubo en el chorro de la llave y agregue NaOH concentrado, gota a gota hasta que la coloración se vuelva naranjada. Esta reaccion se basa en la nitración del benceno con HNO3 concentrado por tanto. Darán reaccion positiva la tirosina y el triptófano.


[editar] Secuenciación de Maxam-Gilbert
En 1976-1977, Allan Maxam y Walter Gilbert desarrollaron un método para secuenciar ADN basado en la modificación química del ADN y posterior escisión en bases específicas[8] Aunque Maxam y Gilber publicaron su secuenciación química dos años antes del trascendental artículo de Sanger y Coulson sobre su método de secuenciación 'mas-menos',[9] [10] lasecuenciación de Maxam y Gilbert rapidamente se hizo mas popular hasta que se pudo utilizar ADN directamente, mientras que el método inicial de Sanger requería que cada comienzo de lectura fuera clonado para producir un ADN de cadena simple. No obstante, con el desarrollo y mejora del método de terminación de la cadena (ver mas adelante), la secuenciación de Maxam y Gilbert ha quedado en desuso debido a su complejidad técnica, el uso extensivo de productos químicos peligrosos y dificultades para escalarla. Ademas, a diferencia del método de terminación de la cadena, los reactivos que se usan en el método de Maxam y Gilbert no se pueden adaptar para utilizrse en un kit biológico estandar.
En resumen, el método requiere marcaje radiactivo en uno de los extremos y la purificación del fragmento de ADN que se desea secuenciar. El tratamiento químico genera rupturas en una pequeña proporción de uno o dos de los cuatro nucleótidos en cada una de las cuatro reacciones (G, A+G, C, C+T). De ese modo se genera una serie de fragmentos marcados a partir del final marcado radiactivamente hasta el primer lugar de 'corte' en cada molécula. Los fragmentos posteriormente se separan por tamaño mediante electroforesis en gel, separando los productos de las cuatro reacciones en cuatro carreras distintas, pero una al lado de la otra. Para visualizar los fragmentos generados en cada reacción, se hace una autoradiografía del mismo, lo que proporciona una imagen de una serie de bandas oscuras correspondientes a los fragmentos marcados con el radioisótopo, a partir de las cuales se puede inferir lasecuencia.
Conocido en ocasiones como 'secuenciación química', este método se originó en el estudio de las interacciones entre ADN y proteínas (huella genética), estructura de los acidos nucleicos y modificaciones epigenéticas del ADN, y es en estos campos donde aún tiene aplicaciones importantes.
[editar] Métodos de terminación de la cadena

Parte de un gel de secuenciación con marcaje radiactivo.
Mientras que el método de secuenciación química de Maxam y Gilbert y el método mas-menos de Sanger y Coulson eran órdenes de magnitud mas rapidos que los métodos previos, el método de terminación de la cadena desarrollado por Sanger era incluso mas eficiente y rapidamente se convirtió en el método de elección. La Técnica de Maxam-Gilbert requiere el uso de productos químicos altamente tóxicos y grandes cantidades de ADN marcado radiactivamente, mientras que el método de terminación de la cadena utiliza pocos reactivos tóxicos y cantidades menores de radiactividad. El principio clave del método de Sanger es el uso de didesoxinucleótidos trifosfato (ddNTPs) como terminadores de la cadena de ADN.
El método clasico de terminación de la cadena o método de Sanger necesita una hebra molde de ADN de cadena sencilla, un cebador de ADN, una ADN polimerasa con nucleótidos marcados radiactivamente o mediante fluorescencia y nucleótidos modificados que terminan la elongación de la cadena de ADN. La muestra de ADN se divide en cuatro reacciones de secuenciación separadas que contienen los cuatro desoxinucleótidos estandar (dATP, dGTP, dCTP and dTTP) y una ADN polimeras C. Reaccion de biuret. En un tubo de ensayo vierta 2 ml de albúminia, agregue 2ml de NaOH al 10% y mezcle perfectamente, agregue CuSO4 gota a gota hasta que aparesca coloración de color azul intenso, violeta o púrpura, ésta es una reaccion común para todas aquellas sustancias que poseen enlaces peptidicos.





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