NORMAS
GENERALES DE TRABAJO EN ELLABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
Un laboratorio de Microbiología es un lugar convenientemente
habilitado donde se pueden manejar y examinar microorganismos. Este tipo de
trabajo debe ser llevado a cabo con una buena técnica aséptica, y por tanto se
requiere un ambiente limpio y ordenado y trabajar
siempre en condiciones de esterilidad (en campanas de esterilidad biológica o
en la proximidad de la llama de un mechero de alcohol o de gas). Aunque los
microorganismos que se manipulen no sean considerados
patógenos, todos los cultivos de todos los microorganismos deben ser manejados
con precaución por su potencial patogenicidad. Es necesario cumplir dos
REQUISITOS BÁSICOS: 1. Restringir la presencia de los microorganismos en
estudio a sus recipientes y medios de cultivo para evitar el riesgo de
contaminarse uno mismo o a un compañero. 2. Evitar que
los microorganismos ambientales (presentes en piel, pelo, aire, ropa, etc.)
contaminen nuestras muestras. Para mantener
estas condiciones, es necesario respetar una serie de NORMAS DE SEGURIDAD: 1.
Es imprescindible el uso de bata de laboratorio. 2. Al
iniciar y finalizar las prácticas, el estudiante se lavará las manos con agua y
jabón. 3. El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar cada práctica es conveniente desinfectar la
superficie de trabajo. Los desinfectantes más
habituales para esto son la lejía y el alcohol (etanol 96°). 3. Los
microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben evitar
los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que puedencrear corrientes
que originen contaminaciones o producir accidentes. 5. Durante las prácticas
está prohibido comer, beber y fumar. Cuando se manipulan microorganismos hay
que evitar llevarse las manos a la boca, nariz, ojos, etc.
6. Libros, carpetas, abrigos y cualquier otro material que no se utilice en la
realización de la práctica deben estar apartados del lugar de
trabajo. 7. Para deshacerse del material contaminado se
utilizarán los recipientes adecuados, que serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe tirar nada contaminado por la fregadera o a la basura
común. 8. Bajo ningún concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del
laboratorio. 9. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar
siempre pipeteadores manuales. 10. En caso de accidente (ruptura de
material, derramamiento de microorganismos, etc.) se comunicará inmediatamente
al instructor.
CALENDARIO DE PRÁCTICAS 1a SEMANA 1er DIA- práctica 1 sQué es un medio de
cultivo en microbiología Preparación de medios de
cultivo generales, de enriquecimiento, selectivos y diferenciales • sólido en
placa • sólido en tubo (slant) • líquido (caldo) Esterilización: Diferentes
técnicas, aparatos y formas de trabajo para lograr la esterilización del
material y para deshechar el material una vez contaminado. 2s DIA- prácticas 1,
2, 3 y 4 -Siembra de los medios preparados el día anterior: • siembra de un cultivo en una placa de LB mediante agotamiento por
estrías. • siembra detres cultivos mediante
agotamiento por estrías en una placa de LB y otra de agar McConkey. • siembra de un caldo de LB. • siembra de dos cultivos en
slant de TSI. • siembra de microorganismos ambientales
a partir de objetos y superficies para demostrar la ubicuidad de los
microorganismos • siembra de levaduras en agar sabouraud: incubación a
temperatura ambiente. Dilución de un caldo con E. coli para calcular en ns de
U.F.C ml. Cultivo de bacterias en anaerobiosis:
Utilización de la jarra de anaerobiosis 3er DIA- prácticas 5 y 6. Resultados prácticas 1, 2, 3 y 4. Tinción de Gram: Cómo se
realiza y cuál es el objetivo de la misma Transformación bacteriana:
Realización de la técnica de transformación de un
cultivo de E. coli (por resistencia
a un antibiótico) como ejemplo de transferencia horizontal de DNA. Ver los
resultados de las diluciones seriadas del
caldo de E.coli y cálculo del
ns de U.F.C ml.
Ver los resultados del
agotamiento por estrías y del
crecimiento en medio líquido y slant. Diferencias entre medio
de cultivo general, selectivo y diferencial. Comprobar la ubicuidad de
los microorganismos Ver el resultado del crecimiento en anaerobiosis. 4s DIA- prácticas 7, 8, 9. Resultados
prácticas 6. Estudio del efecto de antibióticos sobre el crecimiento
bacteriano mediante la técnica del Antibiograma
(Cuantitativo y Cualitativo) Efecto de las altas temperaturas sobre el
crecimiento bacteriano Estudio de un virus (bacteriófagos): Cómo se pueden
visualizar los virus. Ensayo de infecciónde bacterias con virus en medio sólido
Ver el resultado de la transformación bacteriana 5o DIA- prácticas 10, 11 y 12.
Resultados prácticas 7, 8 y 9.
Tinción de Esporas: Cómo se realiza y cuál es el objetivo de la misma Tinción
de cápsula: Cómo se realiza y cuál es el objetivo de la misma Observación de
levaduras al microscopio: Diferencias entre organismos procariotas y eucariotas
al microscopio. Cómo es la célula levaduriforme. Observación de varias especies de levaduras al microscopio.
Ver los resultados de los antibiogramas Ver los resultados del efecto de las
temperaturas sobre el crecimiento bacteriano Ver placas de lisis de los virus
infectando a las bacterias en medio solido
