HEMOCULTIVO


OBJETIVO GENERAL

Conocer la toma de muestra, procedimiento e identificación de microorganismos de interés clínico en un hemocultivo.

OBJETIVOS PARTICULARES
1.-Aprender a manejar correctamente el material y equipo necesario para realizar un hemocultivo.
Aprender a identificar los microorganismos bacterianos patógenos presentes en una muestra sanguínea en base a la morfología colonial.
3.-Aprender a identificar microorganismos bacterianos patógenos presentes en una muestra sanguínea en base a características microscópicas.

INTRODUCCION

La sangre es normalmente estéril, pues no tiene flora normal establecida. Existe un gran número de microorganismos que se pueden aislar de la sangre en caso de una infección, entre los mas comunes tenemos: Enterobacterias, Pseudomona auruginosa, Enterococcus, Staphylococcus aureus, S. epidirmidis, Streptococcus sp ,Corynebacterium sp, Bacteroides, otros anaerobios y levaduras.

Un hemocultivo esta indicado cuando en el paciente hay un rapido aumento relativo del pulso y la temperatura, un cambio sensorial y la aparición de escalofríos, postración e hipotensión. Otras indicaciones incluyen fiebre prolongada, leve e intermitente, asociada a un soplo cardiaco.
Los cultivos de sangre deben obtenerse antes de comenzar el tratamiento con antibióticos o quimioterapéuticos. Nunca debe de confiarse en un solo cultivo de sangre para eliminar la posibilidad de bacteriemia. Las etapas de la enfermedad también es importante por ejemplo; en fiebre tifoidea, cultivos de sangre positivos pueden obtenerse generalmente de la primera semana de la enfermedad y los organismos desaparecen al final de lasegunda semana. Por lo regular las muestras deben tomarse durante el periodo febril.
Solo se puede hacer el diagnostico de una bacteriemia por el crecimiento de agentes patagones en medios de cultivo de una bacteriemia por el crecimiento de agentes patagones en medios de cultivo. Para el examen bacteriológico de la sangre habra que considerar algunos principios de importancia.
1) Una técnica de extracción correcta que reduzca las mínimas posibilidades de contaminación de la flora normal de la piel.
2) Que las cantidades de sangre sean adecuadas para el cultivo, pues muy poca sangre no contiene suficientes bacterias para obtener un buen crecimiento.


3) Para el cultivo deben usarse métodos de cultivo aerobios y anaerobios. Como muchas de las especies que se encuentran en la bacteriemia son exigentes y crecen con dificultad en los medios de cultivo, deben usarse medios ricos y muy nutritivos, El medio base para hemocultivo contiene un caldo nutriente y anticoagulante. Hacer subcultivos de rutina a ciegas en medios de cultivo adecuados.

El procedimiento del hemocultivo varía según las indicaciones mencionadas y los medios de cultivos utilizados.




MATERIAL, EQUIPO, REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO:

MATERIAL BIOLOGICO:

Muestra de sangre tomada en pico febril


EQUIPO:
Estufa bacteriológica
Refrigerador
Microscopio óptico

MEDIOS DE CULTIVOS:
Medios para Cultivo en Sangre
Placas de Agar Mac Conkey O EMB
Placas de Gelosa Sangre
Placas de Medio 110 O Sal Y Manitol
Placas de Biggy O Nickerson
Placas de Thayer Martin O Agar Chocolate


PRUEBAS BIOQUÍMICAS:
Agar Citrato de Simmons
Agar LIA
Agar KIA
Agar MIO
Agar ROJO DE METILO O MR-VPCaldo rojo de fenol con sacarosa
Caldo rojo de fenol con manitol
Agar difenildesaminasa
Caldo urea
Agar gelatina
Agar SIM


REACTIVOS:

Para la extracción sanguínea:
Alcohol al 70 %
Tintura de yodo al 2 %
Tubo para hemocultivo

Para la tinción de Gram:
Colorantes para la tinción de Gram
Aceite de inmersión

Para pruebas bioquímicas:
Reactivo para oxidasa y catalasa
Reactivo de rojo de metilo
Reactivo de Kovacs

Para antibiograma:
Discos para Antibiograma


MATERIAL:

Bata de laboratorio
Cubre bocas
Guantes de latex
Gafas de protección
Gorro quirúrgico
Cerillos o encendedor
Lapiz graso
Cinta masking tape
Atomizador
Franela
Gradilla

Para la extracción sanguínea:

Agujas estériles
Gasas estériles
Torniquete


Para la resiembra:

Mecheros
Asas bacteriológicas
Cajas de Petri desechables estériles
Tubos de ensaye con tapón de rosca de 13 x 100 mm


Para antibiograma:
Hisopos estériles
Tubos de ensaye sin tapón de 13 x 100 mm


Para la tinción de Gram:
Portaobjetos



PROCEDIMIENTO:

a) Toma de muestra
1) Elegir la vena palpando la piel antes de desinfectarla
2) Limpiar la piel alrededor del lugar donde se hara la punción, en círculos de 5 cm de diametro con alcohol del 70% frotando vigorosamente.
3) Aplicar yodo al 2%, en círculos crecientes comenzando por el centro hasta cubrir con yodo toda la superficie anterior. Dejar de actuar el yodo durante un minuto.
4) Si el sitio debe ser tocado por el técnico, este debe desinfectar sus dedos de la misma forma.
5) Insertar la aguja en la vena y extraer 10 ml de sangre.
6) Una vez extraída la aguja, debe limpiarse el area nuevamente conalcohol, ya que muchos pacientes son sensibles al yodo.
7) Antes de extraer la sangre, limpiar con alcohol el tapón del medio de cultivo base para la sangre, dejando secar.
8) Sin quitar la aguja de la jeringa, transferir la sangre al medio cultivo (debe hacerse cerca del mechero) sin quitar el tapón.
9) Mezclar el contenido inclinado suavemente de 2 a 3 veces.
10) Incubar el tubo en tensión de CO2 a 37°C durante una semana observando cada 24 horas.
11) Observar si hay crecimiento en la fase sólida y/o turbiedad en la fase líquida. Continuar la observación semanalmente, observando durante dos semanas o hasta cuatro semanas si se sospecha de endocarditis, brucelosis o bacteremia por anaerobios.
12) En caso de que aparezcan bacterias en el medio, realizar frotis y teñir con la técnica de Gram y hacer las resiembras para el aislamiento de microorganismos en los respectivos medios de cultivo. Realizar subcultivos de la siguiente manera:

b)Siembra en placas:

1) Mezclar el medio y limpiar el tapón con alcohol, extraer la muestra (dos gotas aproximadamente) e inocular en los medios proporcionados, diseminando el inoculo por estría cruzada.
2) Si hay enturbiamiento del medio, hacer frote y teñir con Gram,
3) Incubar las placas 37°C durante 24 horas, las placas de gelosa sangre y Thayer-Martin en tensión de CO2.
4) Revisar las placas. Si hay crecimiento, hacer frotis y teñir con Gram e identificar el microorganismo por las pruebas bioquímicas.
5) Realizar antibiograma.

REPORTAR EL HEMOCULTIVO DE LA SIGUIENTE FORMA:

NOMBRE DEL PACIENTE
FECHA:
TIPO DE ESTUDIO:
RESULTADO DEL CULTIVO:
ANTIBIOGRAMA
LUGAR Y FECHA

RESPONSABLE: Nombre y firma)