EXTENDIDOS DE SANGRE


Fundamento
El examen microscópico de una extensión de sangre periférica, sobre un porta o cubreobjetos de vidrió nos permite obtener valiosa información acerca de los elementos formes de la sangre, muchos de lo cuales no pueden ser evaluados mediante las mediciones cuantitativas realizadas por otros métodos. En general, en un frotis podemos evaluar lo siguiente:

a) Morfología eritrocitaria
b) Concentración y distribución de la hemoglobina
c) Distribución de los eritrocitos
d) Inclusiones y artificios de los eritrocitos
e) Morfología y recuento diferencial de los leucocitos
f) Inclusiones y artificios de los leucocitos
g) Morfología y apreciación cualitativa del número de plaquetas
h) Artificios y agrupación de las plaquetas

Por lo anterior, se considera que la preparación de un extendido de sangre periférica es una técnica fundamental en hematología. Todo profesional del laboratorio clínico debe ser capaz de realizar preparaciones excelentes sin conformarse con resultados mediocres, ya que para observar adecuadamente 1 morfología sanguínea se necesita tener preparaciones de calidad.

Objetivos

Al terminar la practica, el alumno sera capaz de
1. Realizar correctamente los extendidos sanguíneos usando diferentestécnicas.
2. Seleccionar la técnica adecuada identificando sus ventajas y desventajas.

Equipo

Ninguno
Material

a) Biológico
Sangre venosa obtenida con EDTA (practica número 2). b) De laboratorio
Portaobjetos
Cubreobjetos

Procedimiento1

Frotis en cubreobjetos

Esta técnica se prefiere para obtener la mejor definición y distribución celular posible. Se realiza de la siguiente manera

1. Colocar en el centro de un cubreobjetos una gota de sangre de unos 2 mm de diametro, aproximadamente.
2. Inmediatamente, colocar un segundo cubreobjetos sobre el primero, en una posición rotada 900 respecto al primero, de tal modo que los angulos puedan ser facilmente cogidos entre los dedos pulgar e índice de la mano libre. Los dos cubreobjetos estaran formando una 'estrella de ocho picos' (véase Fig. 1).
3. La sangre se extendera de inmediato como una delgada película uniforme; en seguida que ha dejado de extenderse, los cubreobjetos se separan suavemente por un movimiento de deslizamiento en el mismo plano, sin separar las superficies. Si no se eleva ningún cubreobjetos, aparecera una fina y uniforme extensión de sangre en cada uno de ellos. El grosor de la extensión dependera únicamente de la cantidad de sangre aplicada, por lo que es muy importantecalcularla bien.
4. Secar de inmediato soplando vigorosamente con un pedazo de cartón o con una secadora eléctrica.
5. Identificar la preparación.

Ventajas
1. Se obtiene una distribución celular uniforme.
2. Los frotis tienen gran definición.
3. Se pueden montar 203 en un portaobjetos, para su lectura.

Desventajas
1. Son difíciles de rotular.
2. Es diffcil manipularlos.
3. Se rompen con facilidad.
4. Su conservación es problematica.
5. El proceso de tinción es difícil.

Frotis en portaobjetos

Frotis longitudinal. Estas extensiones son preferidas a las anteriores porque son mas faciles de manipular, se rompen menos, se rotulan con facilidad y no requieren montaje. La manera de hacerlas es la siguiente
1. Colocar una gota de sangre de 2 a 3 mm de diametro a 1 o 2 centímetros del borde del portaobjet< colocando éste en posición horizontal sobre la mesa de trabajo.
2. Colocar un segundo portaobjetos (extensor) de modo que forme un angulo de 300 con el portaobjet horizontal, con su eje mayor paralelo a él. El borde mas bajo del portaobjetos extensor, que debe liso y regular, se aplica firmemente sobre la supefficie del primero, de manera que la gota de san~ esté por debajo de él. Entonces, el segundo portaobjetos se desliza lentamente hacia lasangre hasta que se produzca el contacto, después del cual la sangre se deslizara uniformemente entre la superficie de contacto de ambos portaobjetos.
3. El portaobjetos extensor es movido rapida y suavemente en dirección opuesta, manteniendo el ce tacto y el angulo entre los dos portaobjetos. La extensión formada debe ser uniforme y de aproximadamente la mitad de la longitud de la laminilla. El grosor de la extensión depende de la velocidad de movimiento del portaobjetos extensor y del angulo en que se sitúa éste: a mayor angulo may grosor, a mayor velocidad, menor grosor (véase Fig. 2).
4. Una vez que la sangre se ha extendido, se procede a secar rapidamente el frotis, soplando vigorosamente con un cartón o usando una secadora eléctrica. Esto se hace con la finalidad de evitar el apilamiento de los eritrocitos (Rouleaux) y de que los leucocitos permanezcan extendidos sobre el portaobjetos, de lo contrario, tienden a regresar a su forma original dificultando su observación. Nunca se debe secar soplando con la boca pues el aire húmedo ocasionaría alteraciones morfológicas.
5. Identificar la preparación.

Ventajas
1. Son faciles de manipular, teñir y rotular.
2. Son los mas sencillos de realizar.
3. Su conservación es sencilla.
4. Son muy útiles para examinareritrocitos.

Desventajas
1. La distribución de leucocitos no es homogénea pues las células mas grandes, como polimorfonucleares y monocitos, tienden a acumularse cerca de los extremos.

Frotis transversal. Son similares a los anteriores, con la ventaja de que la distribución de las células homogénea. Se realizan de la siguiente forma:
]. Colocar una gota de sangre de 2 a 3 mm de diametro en la parte media y cerca del extremo largo un portaobjetos. Mantenerlo en posición horizontal sujetandolo con los dedos índice y pulgar de la mano que se forme un 'puente' con estos dedos sobre el portaobjetos (véase Fig. 3).
2. Se coloca un segundo portaobjetos (extensor) haciendo un angulo de 300 con el primero y con su ~ mayor perpendicular al portaobjetos horizontal, quedando la gota de sangre abajo de él y apoyando firmemente. Se desliza el extensor hasta hacer contacto con la sangre, la que difunde uniformemente en la superficie de contacto.
3. El portaobjetos extensor se mueve en dirección opuesta hasta llegar al extremo contrario a aquel en que se depositó la gota de sangre. En este momento, se deja descansar sobre el horizontal forman los dos portaobjetos una T. Soltar unos segundos el extensor para que la sangre se difunda uniformemente, entre ambas superficies, en una capa fina.