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Actividad sobre hibridación - procedimiento experimental



Actividad sobre hibridación
es un proceso por el cual se combinan dos cadenas de acidos nucleicos anti paralelas y con secuencias de bases complementarias en una única molécula de doble cadena, que toma la estructura de doble hélice, donde las bases nitrogenadas quedan ocultas en el interior. Esto hace que si irradiamos la muestra con la longitud de onda a la que absorben estas bases (260 nm), la absorción de energía sera mucho menor si la cadena es doble que si se trata de la cadena sencilla, ya que en esta última los dobles enlaces de las bases nitrogenadas, que son las que captan la energía, estan totalmente expuestos a la fuente emisora de energía.


se uniran con sus complementarios bajo condiciones normales: A=T; A=U; C
G; G C; T=A ó U=A



Así que dos cadenas perfectamente complementarias se uniran la una a la otra rapidamente. Por el contrario, debido a las diferentes geometrías de los nucleótidos, una simple variación de las parejas anteriores lleva a inconsistencias entre las cadenas y dificultara la unión.
El proceso de hibridación se puede revertir simplemente calentando la disolución que contiene la molécula. El porcentaje de GC dentro de la cadena condiciona la temperatura de alineamiento y de desnaturalización ya que G se une a Cmediante tres puentes de hidrógeno y A se une a U o T mediante dos puentes de hidrógeno; por tanto, y dado que se requiere mas energía para romper tres enlaces que para romper dos, dicha energía se traduce en una mayor temperatura. El %GC no es igual para todas las especies, es mas, el %GC es distinto incluso entre el ADN nuclear y el ADN mitocondrial, lo que nos da bastante juego en los protocolos de extracción de ADN, según qué tipo vamos a estudiar y esto es importante, entre otros motivos porque existen enfermedades genéticas debidas a mutaciones en el ADN mitocondrial.
En biología molecular experimentalmente se llevan a cabo dos tipos diferentes de hibridación: Tipos, para uniones ADN-ADn, para uniones ADN-ARN.

Procedimiento experimental
1.
La hélice de doble cadena (ADN) es separada mediante un proceso físico (calor) o químico (con una base fuerte, como . Esto rompe los enlaces por que mantienen unidas las dos hebras del ADN.


2. Las dos hebras complementarias se separan, el ADN .
3. Una muestra de cadenas simples (o desnaturalizadas) se mezcla con otra muestra de cadenas simples.
4. La muestra combinada se enfría lentamente, las moléculas sencillas se van emparejando por las zonas complementarias (mas estables y se va formando unanueva molécula hibridada


es un proceso por el cual se combinan dos cadenas de acidos nucleicos antiparalelas y con secuencias de bases complementarias en una única molécula de doble cadena, que toma la estructura de doble hélice, donde las bases nitrogenadas quedan ocultas en el interior. Esto hace que si irradiamos la muestra con la longitud de onda a la que absorben estas bases (260 nm), la absorción de energía sera mucho menor si la cadena es doble que si se trata de la cadena sencilla, ya que en esta última los dobles enlaces de las bases nitrogenadas, que son las que captan la energía, estan totalmente expuestos a la fuente emisora de energía. se uniran con sus complementarios bajo condiciones normales: A=T; A=U; C
G; G C; T=A ó U=A
Así que dos cadenas perfectamente complementarias se uniran la una a la otra rapidamente. Por el contrario, debido a las diferentes geometrías de los nucleótidos, una simple variación de las parejas anteriores lleva a inconsistencias entre las cadenas y dificultara la unión.
El proceso de hibridación se puede revertir simplemente calentando la disolución que contiene la molécula. El porcentaje de GC dentro de la cadena condiciona la temperatura de alineamiento y de desnaturalización ya que G se une a C mediante trespuentes de hidrógeno y A se une a U o T mediante dos puentes de hidrógeno; por tanto, y dado que se requiere mas energía para romper tres enlaces que para romper dos, dicha energía se traduce en una mayor temperatura. El %GC no es igual para todas las especies, es mas, el %GC es distinto incluso entre el ADN nuclear y el ADN mitocondrial, lo que nos da bastante juego en los protocolos de extracción de ADN, según qué tipo vamos a estudiar y esto es importante, entre otros motivos porque existen enfermedades genéticas debidas a mutaciones en el ADN mitocondrial.
En biología molecular experimentalmente se llevan a cabo dos tipos diferentes de hibridación: Tip para uniones ADN-ADN y tipo , para uniones ADN-ARN.
Procedimiento experimental
1.
La hélice de doble cadena (ADN) es separada mediante un proceso físico (calor) o químico (con una base fuerte, como . Esto rompe los enlace que mantienen unidas las dos hebras del ADN.
2. Las dos hebras complementarias se separan, el ADN se
3. Una muestra de cadenas simples (o desnaturalizadas) se mezcla con otra muestra de cadenas simples.
4. La muestra combinada se enfría lentamente, las moléculas sencillas se van emparejando por las zonas complementarias) y se va formando una nueva molécula hibridada







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