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Aizlamiento de rhizobium- MEDIO DE CULTIVO LM



AIZLAMIENTO DE RHIZOBIUM
MEDIO DE CULTIVO LM
* Manitol
* K2HPO4
* MgSO4 * 7H20
* NaCl
* Extracto de levadura
MATERIALES Y SUSTANCIAS
1. MATRAZ
2. ALGODÓN,PAPEL ALUMINO,GASA,LIGAS
3. ASA DE TRANSFERENCIA
4.
AUTOCLAVE
5.
PEACHIMETRO

PROCEDIMIENTO
1. Se coloca en el matraz 100ml de LM.
2. Luego con el peachimetro medir el LM. (pH 6,4-6,6).
3. Se pone a esterilizar el Matraz con LM junto con el magneto en el autoclave a una temperatura de 121oC, aproximadamente por una hora.
4. Una vez esterilizado el Matraz, dejar enfriar.


5. Tomar la muestra de cultivo puro de rhizobium con un asa de transferencia y colocarla a un costado de la parte interna del matraz. Taponar
6.
Colocarlo en el calentador agitador por unos 10 días maximo.
7. El LM SE tornara de color cremoso por la presencia de rihizobium y de color amarillo por la presencia d contaminantes.
8. Una vez listo se lo pone a refrigerar hasta su utilización.
GRAFICOS
PREPARACIÒN DEL MEDIO DE CULTIVO LM




Rhizobium
PLANTAS:
* Estolón de Maní Forrajero
* Semillas decentrosema, pueraria y gandul.
MATERIALES:
* 200 vasos desechables
* Tierra Fértil
* Regadera, carretilla, pala, guantes, mascarillas.
* Invernadero
SUSTANCIAS:
* Captan e hidrocomplex
PROCEDIMIENTOS
1. Tomar la tierra fértil y llevarla al invernadero.
2. Agujerar la parte inferior de los vasos desechables.
3. Una vez agujerados los vasos llenarlos con la tierra previamente desinfectada con Captan e hidrocomplex, llenar hasta el tope del vaso.
4. Tomar las semillas ya previamente curadas y sembrar en cada vaso
* 80 vasos con frejol Gandul(2 semillas)
* 40 vasos con maní Forrajero( 1 estolón)
* 40 vasos con Centrosoma(3 semillas)
* 40 vasos con Pueraria( 5 semillas)
5. Regar las semillas al menos cada dos días.


• Las células madre unipotentes: pueden formar únicamente 2 tipos de células madres
- Laqilosis: Célula madre muy rugoso que contienen ribosomas.
- Enbofilosis: Célula lisa que contiene un líquido especial llamado vasiofelina, que ayuda a que el cuerpo no endurezca en la reproducción de las células madre.
Embriones de repuesto: Las células madre pueden provenir de embriones extra que han sido almacenados en clínicas de fertilidad y que no fueron utilizados por las parejas donantes para la concepción de niños.
Embriones de propósito especial: Éstos son embriones creados por medio de fertilización in vitro (artificialmente en el laboratorio) para el propósito específico de obtener células madre.
Embriones clonados: Son embriones clonados en laboratorios por medio del método de transferencia somatica nuclear, con el fin de cosechar sus células madre.
Fetos abortados: Células obtenidas y cosechadas de los fetos de desarrollo temprano que han sido abortados.
Cordones umbilicales: Este tejido post-parto posee potencial para la investigación. Sin correr riesgo ni la mama ni su hijo, la sangre del cordón umbilical se guarda en especiales condiciones, y si es necesario puede ser utilizada en numerosas anomalías.
Tejidos u órganos adultos: Se pueden obtener células madre de tejidos u órganos provenientes de adultos vivos durante lacirugía.
Cadaveres: Se puede obtener una fuente adicional de células madre humanas a partir de células progenitoras neurales de tejidos post-mortem (hasta 20 horas después de la muerte).
El estudio de las células madre nos permitira conocer los mecanismos de especialización celulares. Qué mecanismos hacen que un gen sea activo y haga su trabajo y qué mecanismos inhiben la expresión de ese gen. El cancer, por ejemplo, es un caso de especialización celular anormal.
Las células madre pueden servir para probar nuevos medicamentos en todo tipo de tejidos antes de hacer las pruebas reales en animales o en humanos.
Las células madre tendran aplicaciones en terapias celulares, medicina regenerativa o ingeniería tisular. Muchas enfermedades son consecuencia de malfunciones celulares o destrucción de tejidos. Uno de los remedios, en casos muy graves, es el transplante. Las células madre pluripotentes estimuladas a desarrollarse como células especializadas ofrecen frecuentemente la posibilidad de reemplazar células y tejidos dañados. Así se podran emplear para casos de Parkinson y Alzheimer, lesiones medulares, quemaduras, lesiones de corazón o cerebrales, diabetes, osteoporosis y artritis reumatoide.
El costo de recoger, analizar, congelar y conservar una sola unidad de sangre umbilical varía de banco a banco, el pago inicial esta aproximadamente entre 800 y 2000 dólares dependiendo del paquete que contrates e incluye la inscripción al programa. Después hay que hacer pagos anuales y puedes encontrar desde 100 dólares al año, en los planes mas económicos. Generalmente mientras mas años contrates, menor es la cuota anual a pagar.

6. Después de dos semanas o cuando la semilla haya germinado tomar 15 vasos de cada muestra para la inoculación de los tratamientos.
* 5 vasos con rhizobium
* 5 vasos con urea
* 5 vasos solo semilla(testigo)

TRATAMIENTOS:
1. Inocular Rhizobium liquido alrededor de las plantas
2. Colocar urea alrededor de las plantas
3.
Testigo (solosemilla
DATOS A TOMAR:
1. PORCENTAJE DE GERMINACION (cuantas semillas germinaron)
2. ALTURA DE LA PLANTA(medir cada 5 días en cm desde el tallo hasta lo mas alto de la planta )
3. DIAMETRO DEL TALLO (con el calibrador medir cada 5 días
4. PESO FRESCO ( pesar la raíz)
5. PESO FRESCO( pesar el tallo)
6. PESO FRESCO(pesar las hojas)
7. NUMERO DE NODULOS /PESARLOS
8.
PESO SECO (raíz,tallo y hojas)

GRAFICOS:


PESO FRESCO Y SECO DE LAS PLANTAS
MATERIALES Y SUSTANCIAS:
1. BALANZA ELCTRONICA
2. PAPEL ALUMINIO,REGLA,TIJERA,AGUA DESTILADA
3. ESTUFA
PROCEDIMIENTO
1. Tomamos las plantas(pueraria,centrosema,mani forrajero) de los 3 tratamientos.
2. En el laboratorio lavamos con agua en especial la raiz.
3. Medimos el tallo hasta el apice de cada planta
4. Medimos la raiz
5.
Cortamos la raiz,tallo y hojas. Pesamos cada parte en la balanza.
6. Tomar apuntes
7. Capa parte de la planta envolvimos con papel aluminio para luego proceder a colocar en la estufa por unas 24 horas.
8. Sacamos y tomamos apuntes del peso seco de cada parte de la planta.
GRAFICOS:





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