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El inyector de muestra que se me ocurrió , Para la inyección de la muestra



El inyector de muestra que se me ocurrió

Al recipiente lleno con de la solución de trabajo (ST), se vacía con la inyectadora colocada en la parte inferior de éste (colr en crema en la figura).
A continuación, con ayuda de una micro-inyectadora se inyecta la muestra (en azul), través de un tubito vertical cercano al capilar el cual tiene un agujero lateral en su parte inferior; cuando sale la gota de la muestra por el agujero, esta “toca” el capilar y la muestra entra por difusión dentro del capilar. Se procede a lavar con solución trabajo, sacando con ayuda de otra inyectadora los lavados y finalmente, se repone la ST en el recipiente. Las inyectadoras, puede estar conectada al recipiente a través de un tubito de PVC u otro material plastico, por lo que puede estar colocada en el panel del instrumento.




La ventaja tiene este sistema son: Primero es sencillo de construir, y en segundo lugar, todos los componentes al estar fijos, se evita romper el capilar. Otra ventaja es que la muestra puede entrar mas concentrada al capilar.
El inconveniente si es que lo hay, es que el tiempo de difusión de la muestra dentro del capilar, debe ser siempre igual para la muestra en cuestión habría que hacer pruebas para la su precisión de este sistema.
Publicado por Fundado en 1983 en 13:47 0 comentarios
lunes 29 de noviembre de 2010
El Inyector

Lamejor manera que he encontrado para introducir la muestra es a través de una copita tal como se indica en el diseño anexo(1). La ventaja de este sistema es que permite la introducción en el capilar tanto de aniones y cationes como también de compuestos neutros. Por otra parte, no ocurre una introducción selectiva de cationes y aniones debido a diferentes estados de oxidación.
Por la entrada del capilar, se coloca una llave de paso que trae la solución soporte (SS) desde un frasco dosificador o la muestra.
Después de que el capilar comience a gotear la SS que entra por la salida del capilar, se llena el embudito con la SS que contiene el frasco dosificador. Cuando el embudo empiece a rebosarse se cierra la llave de paso deteniéndose la adición de la SS y si los niveles de la SS de los recipientes de entrada y salida se encuentran a nivel, el flujo hidrodinamico, debe cesar.



Para la inyección de la muestra
Se gira la llave de paso hacia la solución de muestra por unos segundos, hasta que en la salida de la copa, salgan una o dos gotitas y a continuación se procede a pasar la SS, que arrastrara la muestra hasta el capilar. Esta etapa es crítica y requerira un proceso de calibración.

Para evitar inconvenientes en la ruptura del capilar, las diferentes piezas de este sistema debe estar pegadas con goma loca, soldimix, etc. El frasco de SS debe estaren un soporte, la llave de paso fija al chasis del equipo.
Retomando la electroforesis capilar
Como en estos momento estan funcionando y practicamente los instrumentos en el Laboratorio cubren las necesidades del mercado, me dedicaré al estudio e implementación de la técnica de electroforesis capilar. Se ira anotando los resultados que vaya obteniendo.

Lo primero es construir un capilar por el procedimiento indicado en una entrada anterior; se le va a colocar una camisa para enfriamiento con agua y para comenzar, hacer pruebas de movilidad de iones con soluciones buffer-LSNa para que estas sean arrastradas por el flujo electro forético. El flujo electroforético, puede variar dependiendo del pH y de la concentración de detergente aniónico (Laurilsulfato de Na) e incluso invertirse utilizando detergentes catiónicos.
Para poder apreciar el FEF es necesario que la muestra sea coloreada, tener un detector, o que se pueda ver gotear la solución por un extremo del capilar. Si se quiere ver gotear la solución, habría que hacer un “pozo” con buffer, el catodo del alto voltaje y una salida del capilar ( Fig. adjunta).

El problema con esta última opción es que se generan burbujas de gas dentro del capilar. Para evitar las burbujas, se fractura el capilar, se medio pegan los dos pedazos y se rodea por una membrana con baja resistencia (celofan), demanera de hacerle un escape a la corriente, pero no a la solución.

El detector que vamos a construir es el externo de alta frecuencia MHz). Tiene la ventaja de que es sencillo, esta aislado del alto voltaje, no toca la solución y ademas es muy sensible. Ya dimos algunos detalles en la entrada del 2008.

Voy a utilizar como fuente de poder la de 400 V y ver como se comportan las soluciones bajo las condiciones anteriores. Luego utilizaré la fuente de alto voltaje con la bobina de carro, el flayback y finalmente se utilizara un doblador de voltaje con el que espero lograr un voltaje de unos 20 kV. La ventaja del alto voltaje es doble: en primer lugar, aumenta la resolución de los “picos” y en segundo lugar, la corriente que circula se hace menor, así, si duplicamos el voltaje, por conservación de la energía, la corriente disminuye a la mitad, lo cual evita el calentamiento del buffer dentro del capilar. Para minimizar el calentamiento del capilar, le colocamos una camisa por la que circula agua que cae por gravedad desde un frasco de “sueros”.

Quedaría por construir el sistema para cargar la muestra, pero eso es mas adelante, según los resultados a obtener. Inicialmente se vaciara una de las copas y se llena con la muestra. Se lava bien la copa con agua destilada y a continuación se llena con el buffer a utilizar.
El Alto Voltaje

Enprimer lugar vamos a la fuente de voltaje: Como el equpo funciona con un alto voltaje, lo que se nos ocurrio fue usar un flayback de TV. Lograndose un voltaje de unos 15 kV. En nuestro primer diseño, el voltaje no era muy estable (funcionaba con un diodo) razón por lo cual hicimos un puente con 4 diodos (de micronda) y mejoró su estabilidad. Hay otros circuitos que emplean 2 transistores



El capilar

Inicialmente estabamos trabajando con un capilar de un termómetro, pero este se nos rompio (vida infra) y decidimos construírnos un capilar en barbotina con sus recipientes para colocar el buffer y a manera de cruz el capilar para 'inyectar la muestra'. Tal como se indica en el dibujo anexo. Las primeras pruebas indicaron que esposible: un alambre de cobre de unos 100 micrones de diametro sirve de molde. Al quemar la barbotina, este se 'evapora' y queda el capilar. El problema es que la porcelana queda porosa y estamos estudiando otras alternatiavas: Con un capilar de vidrio al que se la ha insertado un alambre de cobre de 0 mm de diametro, se 'forra' con barbotina y se quema a 1200 ºC; a esa temperatura el cobre se 'evapora' y queda el tubito de vidrio que es impermeable otra posibilidad es hacer el capilar por estiramiento rapido de un tubo de unos 5 mm de diametro y vaciarle resina.

EL DETECTOR
Hay varios tipos de detectores que pueden serfacilmente construídos en un Laboratorio: El de conductividad, el fotocolorimétrico, el voltamétrico y el de oscilometría. Debido al alto voltaje que pasa a través del capilar, el que menos interferencias presenta es el fotocolorimétrico que funciona con un led y el de oscilometría.

Detector oscilométrico.
El principio es muy sencillo, se coloca un alambre de cobre envolviendo el capilar y a un miímetro de distancia se colocan otra espira. Las espiras se forran con estaño, a una de las espiras se le aplica una señal de unos 125 KHz, la segunda espira se encuentra apartada 1 mm de la anterior. La segunda espira funciona como una antena y la intensidad de la señal captada se encuentra influenciada por los iones que pasan por el capilar. Esta señal es amplificada, rectificada y filtrada.
En el diagrama que se presenta a continuación es el diseño que nosotros hemos realizado si hay otro igual, es pura coincidencia

Electroforesis de dos dimensiones
El novedoso sistema de electroforesis 2D de Hoefer Inc. incluye: la unidad de enfoque isoelectrico de primera dimension IEF100 y la unidad de electroforesis de gel de segunda dimensión SE900. La IEF100 ayuda a incrementar la calidad y velocidad de las separaciones
y el diseno de un solo tanque de la SE900 asegura corridas libres de fugas y la posibilidad de reutilizar la solucion amortiguadora.





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