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Diagnostico sifilis - obtención de las muestras, microscopia de campo oscuro, pruebas serológicas, ruebas no treponémicas



Para el diagnóstico de la sífilis, tradicionalmente, se cuenta con tres grupos de pruebas. Por examen directo mediante microscopía en campo oscuro y por fluorescencia directa, mediante serología y por cultivo en células epiteliales de conejo. Por serología se tienen dos tipos de pruebas, las pruebas no treponémicas como VDRL y RPR (Rapid plasma reagin) y las pruebas treponémicas como como MHA-TP (Microhemaglutinación para T pallidum).
OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS
Para la microscopia en campo oscuro, la muestra debe ser fluido seroso libre de eritrocitos y residuos de tejidos o puede ser materia¡ obtenido por aspiración de ganglio; se limpia la lesión con solución salina, sólo si estuviera contaminada.
Puede ser necesario realizar una abrasión leve de la lesión, para obtener fluido seroso, el cual se coloca directamente en una lamina, la que debe examinarse antes de transcurridos 20 minutos, ya que el Treponema pallidum es muy sensible al oxígeno, calor, cambios de pH y desecación. Nunca se debe tomar para campo oscuro muestras de cavidad oral, o anal debido a la contaminación con espiroquetas no patógenas.


Para la fluorescencia directa se obtiene la muestra de manera similar que la descrita para el campo oscuro, pero se deja secar al medio ambiente.
MICROSCOPIA DE CAMPO OSCURO
La microscopía de campo oscuro es la prueba de elecciónpara la sífilis primaria sintomatica.
Los treponemas, morfológicamente, son espiroquetas muy delgadas y helicoidales, estos gérmenes son tan delgados, que no pueden ser observadas en un microscopio de luz a campo normal, y es necesario un microscopio que tenga campo oscuro. El T. pallidum se diferencia de otros microorganismos espiralados porque son mas delgados, sus espirales son muy regulares y presentan un movimiento característico en tirabuzón. Cuando se obtiene hallazgos positivos al campo oscuro, se debe realizar obligatoriamente pruebas serológicas confirmatorias.
PRUEBAS SEROLÓGICAS
Se denomina pruebas serológicas a las realizadas sobre el suero, uno de los componentes de la sangre, para detectar anticuerpos.

Las pruebas serológicas son de dos tipos: no-treponémicas y treponémicas. Las pruebas no treponémicas son usadas para despistaje, son económicas y, también, sirven para evaluar la eficacia del tratamiento. Las pruebas treponémicas emplean como antígeno al T. pallidum y detectan anticuerpos específicos. Se le utiliza para verificar cuando las pruebas no-treponémicas son reactivas o como pruebas confirmatorias. Existen varias técnicas serologicas que se utilizan dependiendo de los anticuerpos de los cuales se sospecha entre las que se pueden mencionar aglutinación, precipitación, fijación del complemento, anticuerposfluorescentes y otras.



RUEBAS NO TREPONÉMICAS
Las pruebas no-treponémicas incluyen el VDRL (Venereal Disease Research Laboratory, RPR (Rapid plasma reagin), USR (Unheated-serum reagin).
Todas estas pruebas estan basadas en antígenos en solución alcohólica, que contienen cardiolipina, colesterol y lecitina purificada (un fosfolípido). Estas pruebas detectan anticuerpos antilipoídeos. Que aparecen como respuesta a los antígenos lipoideos que estan presentes en la treponema, aunque no sean específicos del mismo.
Antígeno: sustancia que estimula la producción de anticuerpos en el interior del organismo.
VDRL
(Venereal disease research laboratory)
Se realiza calentando el suero, luego se mezcla con el complejo reaginina purificado y se observa en el microscopio la aglutinación; posteriormente los resultados reactivos se someten a diluciones seriadas a cada dilución se le realiza la prueba de VDRL y se registra el titulo maximo obtenido. para reportar el título (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, etc.) Esta prueba se puede realizar en lamina y ser observada al microscopio como un precipitado de partículas finas (floculación), o se puede realizar en un tubo de ensayo y ser leída macroscópicamente.
Esta prueba se puede realizar en lamina y ser observada al microscopio como un precipitado de partículas finas (floculación), o se puede realizar enun tubo de ensayo y ser leída macroscópicamente.
RPR (reaginina rapida en plasma
Se denomina reagina a una proteína similar a un anticuerpo, que se une a un antígeno, como pueden ser la cardiolipina y la lecitina en las pruebas no-treponémicas, y se denomina anticuerpos reagínicos.
Anticuerpo: Es una proteína producida por el sistema inmunitario del cuerpo cuando detecta sustancias dañinas, llamadas antígenos. Los ejemplos de antígenos abarcan microorganismos (tales como bacterias, hongos, parasitos y virus) y químicos.
La prueba de reagina rapida en plasma (RPR) mide los anticuerpos, llamados reaginas, que pueden ser producidos por el Treponema pallidum, la bacteria que causa la sífilis. La muestra se mezcla con una suspensión que posee cardiolipina, lecitina y colesterol en partículas de carbón. Si la muestra es positiva se observa pequeños grumos negros (floculación). El resultado se reporta como reactivo o no reactivo; todos aquellos reactivos deben ser diluidos seriadamente para realizar la titulación, y se reporta la dilución mas alta que exhibe reacción.

PRUEBA TREPONEMICAS
Se usan para confirmar la existencia de infección después de una VDRL o RPR.

MHATP Hemaglutinación del Treponema Palido).
Esta prueba usa como antígeno el treponema pallidum y detectan anticuerpos contra los componentes celulares del treponema.







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